anti-CD20scFv-IgGFc-CD80-CD28-ζ及anti-CD20scFv-IgGFc-CD80轉染人T淋巴細胞對原代CLL細胞殺傷作用的比較.pdf

1、將本室已經(jīng)成功構建的含anti-CD20scFv/IgG Fc/CD80片段的PLNCX質粒和anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ片段的PLNCx質粒,分別轉染入正常人外周血T淋巴細胞中,并通過體外實驗比較兩種不同的細胞特異性對CD20陽性的原代慢性淋巴細胞白血病(CLL)細胞的殺傷及誘導分泌IL-2和IFN-γ能力的差異,從而尋找一種新的基因治療途徑,用于CD20陽性的惡性淋巴瘤的生物治療方案. 方法

2、： 1.穩(wěn)定轉染原代T淋巴細胞:將兩種質粒分別通過脂質體轉染入逆轉錄病毒包裝的PA317細胞中,把包裝好的逆轉錄病毒感染T淋巴細胞,經(jīng)G418(600μg/ml)篩選一周獲得兩種穩(wěn)定轉染的T淋巴細胞. 2. 比較兩種穩(wěn)定轉染的T細胞對CD20陽性的原代CLL細胞的殺傷作用:把轉染的兩種不同的T細胞與CD20陽性的原代CLL細胞在體外分別共同培養(yǎng),在顯微鏡下觀察CD20陽性的原代CLL細胞生長狀態(tài),檢測轉染T細胞激活情況包

3、括ELISA法測共同培養(yǎng)的上清液中IL-2、γ-IFN等細胞因子水平,并比較其差異. 結果： 1.包裝的含目的基因的逆轉錄病毒感染T淋巴細胞后經(jīng)G418(600 μg/ml)篩選一周,獲得大量穩(wěn)定轉染的原代T淋巴細胞,即為我們實驗所得的基因修飾的特異的T淋巴細胞. 2. 兩種穩(wěn)定轉染的T細胞分別與CD20陽性的原代CLL細胞在體外共同培養(yǎng)后,在顯微鏡下觀察CD20陽性的原代CLL細胞碎片增加,數(shù)量明顯減少,培養(yǎng)上

4、清液中IIJ-2和γ-IFN水平與對照組相比明顯升高(P<0.01),且兩種不同的轉染細胞的上清液中IL-2和γ-IFN水平結果不同 (P<0.01). 結論： 1.通過細胞轉染的方法 anti-CD20scFv/IgGFc/CD80 及anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ嵌合錨定T細胞能夠成功構建.用流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)基因修飾的T細胞表達重組蛋白可達20﹪以上. 2.anti-CD20

5、scFv/IgGFc/CD80及anti-CD20scFv/IgGFc/C;D80/CD28/ζ嵌合錨定T細胞能夠在體外有效地特異性殺傷CD20陽性的原代CLL細胞,均能誘導IL-2、IFN-γ的顯著增高. 3.與anti-CI)20scFv/IgGFc/CD80基因修飾的T細胞相比,anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ基因修飾的T細胞殺傷原代CLL細胞后,IL-2和IFN Y的表達有顯著增高,P<0.