Apelin促進脂肪間充質(zhì)干細胞增殖分化的分子影像研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　缺血性血管疾病是目前威脅人類健康的重要疾病，其中促進血管再生是目前治療缺血性疾病的主要方向。在眾多促進血管再生的治療方法中，干細胞治療缺血性疾病成為了近年來的研究熱點。然而，很多研究包括我們以往的研究結(jié)果顯示，成體干細胞尤其是間充質(zhì)干細胞在移植后的存活數(shù)量較少而難以發(fā)揮長期的治療作用。因此，如何促進成體干細胞在體內(nèi)缺血部位的存活、整合、增殖并分化依舊是干細胞治療研究的難點。
　　Apelin是新發(fā)現(xiàn)的一

2、種小分子活性肽，是血管緊張素受體-1相關(guān)受體蛋白(putativereceptorproteinrelatedtotheangiotensinreceptorAT1，APJ)的內(nèi)源性配體。具有重要的心血管調(diào)節(jié)功能：舒張血管、降低血壓、保護心肌受損、增強心肌收縮力、拮抗血管緊張素Ⅱ?qū)π难芟到y(tǒng)的不良作用。同時對血管內(nèi)皮細胞、心肌細胞具有保護作用。
　　本實驗將在我們以往研究的基礎(chǔ)上，利用分子影像學(xué)等手段，觀察Apelin對于間充質(zhì)干

3、細胞在缺氧條件下對細胞增殖所產(chǎn)生的影響以及Apelin對于干細胞保護作用的機制，并為下一步成體干細胞治療的長期獲益和不良影響進行可靠評估。
　　方法：
　　第一部分：脂肪間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定：用酶消化法分離?-actin-lucFVB轉(zhuǎn)基因小鼠的脂肪間充質(zhì)干細胞（AD-MSCs），流式細胞術(shù)鑒定干細胞標(biāo)志，生物發(fā)光成像確定細胞熒光素酶（Fluc）的表達。
　　第二部分：不同濃度的Apelin對缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的脂

4、肪間充質(zhì)干細胞增殖、凋亡的影響：建立缺氧（H）6h/復(fù)氧（R）2h細胞模型，分3組：①空白對照組；②缺氧/復(fù)氧組（H/R）；③H/R＋Apelin干預(yù)組(10-10-10-5mol/L)。MTT法和生物發(fā)光成像（BLI）測定各組細胞增殖率，TUNEL檢測細胞凋亡。
　　第三部分：Apelin對脂肪間充質(zhì)干細胞在后肢缺血小鼠體內(nèi)的作用:實驗共分四組：假手術(shù)+AD-MSCs組、假手術(shù)+AD-MSCs+Apelin組、缺血+AD-MSC

5、s組、缺血+AD-MSCs+Apelin組。酶消化法培養(yǎng)小鼠AD-MSCs，建立后肢缺血模型，在模型后肢缺血部位按分組注射AD-MSCs(1×106)或AD-MSCs+Apelin。生物發(fā)光成像檢測細胞活性。
　　第四部分：Apelin影響小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞增殖、凋亡的機制：建立缺氧（H）6h/復(fù)氧（R）2h細胞模型，分3組：①空白對照組；②1×10-6mol/LApelin組；③Apelin+拮抗劑LY294002組（1×10

6、-6mol/LApelin+20μmol/LLY294002）。免疫印跡法檢測細胞內(nèi)激酶磷酸化Akt的表達。
　　結(jié)果：
　　1．流式細胞術(shù)結(jié)果顯示脂肪間充質(zhì)干細胞表達CD44及CD90，而且熒光素酶（Fluc）的表達與細胞數(shù)量呈線性相關(guān)。
　　2.在缺氧環(huán)境中，Apelin的干預(yù)可顯著增加AD-MSCs的增殖，抑制凋亡。
　　3.Apelin可促進后肢缺血模型中AD-MSCs的存活。
　　4.Wester