乳黃制劑對肝硬化模型大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的影響.pdf

1、目的：腸源性內(nèi)毒素血癥(IETM)在各種肝病，特別是肝硬化和重癥肝炎時發(fā)生率高。肝硬化患者由于腸道菌群失調(diào)，屏障功能受損，細(xì)菌易位增多，門體分流，同時肝臟細(xì)胞功能、Kupffer細(xì)胞功能減退，對內(nèi)毒素(LPS)降解能力下降，使腸道產(chǎn)生的內(nèi)毒素大量進(jìn)入外周循環(huán)．IETM導(dǎo)致肝損傷機(jī)制很復(fù)雜，可直接損害肝細(xì)胞，還可以通過激活Kupffer細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞釋放促炎介質(zhì)間接損害肝細(xì)胞，又可誘發(fā)全身代謝和血流動力學(xué)紊亂，引起全身器官功能衰竭，出

2、現(xiàn)腹水、肝性腦病、肝腎綜合征等種種并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。中醫(yī)理論中沒有對腸源性內(nèi)毒素血癥的專門論述，但根據(jù)其致病特點(diǎn)，屬于“內(nèi)生毒邪”范疇。導(dǎo)師張赤志教授根據(jù)中醫(yī)理論和臨床經(jīng)驗，認(rèn)為本病病因病機(jī)為是由于肝脾腎功能失調(diào)，水濕內(nèi)停，瘀血阻滯，濕瘀互結(jié)，郁久化熱成毒。毒邪再犯肝體，肝失疏泄，脾失健運(yùn)，腸道傳導(dǎo)失司，腑濁內(nèi)生，病位在肝、腸．據(jù)此立“通下解毒法”，結(jié)合“肝與大腸相通，肝病宜疏通大腸”的學(xué)術(shù)思想，選用酒制大黃和乳酸

3、菌素組成乳黃制劑防治肝硬化IETM．我們在前期防治急性肝性腦病的實(shí)驗研究中發(fā)現(xiàn)乳黃制劑(湖北省衛(wèi)生廳資助課題)能降低血漿內(nèi)毒素水平，較實(shí)驗性大鼠空白對照組，模型組，乳果糖對照組作用明顯。為了進(jìn)一步研究該制劑在防治肝硬化IETM的作用機(jī)理，將從細(xì)胞分子水平進(jìn)行探討。 方法：SPF級雄性Wister大鼠88只，體重200-230克，隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、預(yù)防組、預(yù)防對照組、模型治療組、模型治療對照組。除正常組外，其余各組均采

4、用CcL4復(fù)合因素法制造肝硬化模型，飼養(yǎng)10周。正常組、模型組蒸餾水2ml/d灌胃；預(yù)防組、預(yù)防對照組在造模同時分別給予乳黃制劑、乳果糖2ml/d灌胃；造模第9周開始模型治療組、模型治療對照組分別給予乳黃制劑、乳果糖2ml/d灌胃連續(xù)2周。第10周末處死大鼠取材。 (1)在無熱源條件下采右心室血5 ml檢測血內(nèi)毒素水平； (2)半定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈法(RT-PCR)檢測大鼠肝組織LBPmRNA、CD14mRNA、TLR

5、-4mRNA的表達(dá)； (3)檢測血清D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平了解對腸通透性的影響； (4)取小腸組織的提取液200μl，應(yīng)用自動放免儀測定各組樣品的腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(S-IgA)濃度，了解對腸道免疫屏障功能的影響； (5)取肝右葉、脾組織各0.1g用生理鹽水洗凈后進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，觀察腸道細(xì)菌移位的情況。 (6)取肝左葉作病檢。 結(jié)果： (1)乳黃制劑可明顯降低肝硬化大鼠內(nèi)毒

6、素水平(P<0.05)； (2)乳黃制劑可下調(diào)肝硬化大鼠肝組織LBPmRNA、CDl4mRNA、TLR4mRNA的表達(dá)水平，從而減少內(nèi)毒素對肝臟的直接或間接的傷害，尤其是模型治療組療效更佳； (3)乳黃制劑可明顯降低肝硬化大鼠血清D-乳酸、DAO水平(P<0.05)，降低腸通透性，尤以預(yù)防組效果明顯； (4)乳黃制劑能有效提高腸黏膜s-IgA的分泌水平(P<0.05)，早期干預(yù)效果佳； (5)預(yù)防組經(jīng)過乳

7、黃制劑干預(yù)后沒有出現(xiàn)腸道細(xì)菌移位情況； (6)乳黃制劑能改善預(yù)防組和模型治療組肝組織的肝硬化以及纖維組織增生、炎性細(xì)胞浸潤程度，其中預(yù)防組肝組織的病理變化改善明顯． 結(jié)論：乳黃制劑防治肝硬化大鼠內(nèi)毒素血癥的作用，可能有下列機(jī)制實(shí)現(xiàn)： ①清除腸道內(nèi)毒素，同時通過抑制LPS與脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)以及相應(yīng)受體CD14、TLR-4結(jié)合，降低腸道內(nèi)毒素的吸收； ②提高腸道局部免疫功能，有效阻止有害菌對腸黏膜的黏