非酒精性脂肪性肝病大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥與PPARa的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種無過量飲酒史，以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征。NAFLD已成為常見肝病之一，疾病譜隨病程的進(jìn)展表現(xiàn)不一，主要包括單純性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver，NAFL)、脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)、脂肪性肝纖維化和肝硬化。在NAF

2、LD漫長的病程中，NASH是NAFL發(fā)生肝硬化的必經(jīng)階段。肥胖、Ⅱ型糖尿病、高脂血癥等單獨(dú)或共同構(gòu)成NAFLD的易感因素。但其發(fā)病機(jī)制至今仍存在爭議，尚未闡明；且目前尚無確切有效治的療藥物。研究發(fā)現(xiàn)NAFLD患者多伴有小腸細(xì)菌過度生長(Small Intestinal BacteriaOvergrowth SIBO)，SIBO可以影響體內(nèi)脂質(zhì)代謝，增加肝臟脂質(zhì)沉積，對非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展起到主要作用。
　　盡管研究發(fā)現(xiàn)非酒精性

3、脂肪性肝病患者存在小腸細(xì)菌過度生長及腸源性內(nèi)毒素血癥(Intestinal endotoxemia IETM)，但其在NAFLD中的具體作用機(jī)制及對機(jī)體脂質(zhì)代謝的影響機(jī)制尚未完全闡明。
　　過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activatedreceptors，PPARs)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在肝臟的脂質(zhì)代謝過程中具有重要作用，且其亞型PPARα主要對肝臟脂肪酸及甘油三酯代謝進(jìn)行調(diào)控。因此腸源性

4、內(nèi)毒素血癥是否可通過影響PPARα mRNA的表達(dá)來影響肝臟脂質(zhì)代謝有待進(jìn)一步驗(yàn)證，對它們之間關(guān)系的研究可能為非酒精性脂肪肝的防治提供了新的方向。
　　本實(shí)驗(yàn)研究了高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝炎大鼠血清內(nèi)毒素水平的變化，及其肝組織PPARα mRNA的表達(dá)，并給予具有調(diào)節(jié)腸道菌群作用的微生態(tài)制劑進(jìn)行干預(yù)，觀察它對肝臟脂肪變和腸源性內(nèi)毒素血癥的作用，這對深入認(rèn)識NAFLD的發(fā)病機(jī)制具有重要意義，并為非酒精性脂肪肝提供了新的治療靶點(diǎn)。

5、
　　目的：
　　1通過高脂飲食制作非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型；2探討腸源性內(nèi)毒素在NAFLD發(fā)病中的作用及其與PPARα的關(guān)系；3觀察微生態(tài)制劑對實(shí)驗(yàn)性NAFLD的治療效果，探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1制備動物模型及實(shí)驗(yàn)設(shè)計：
　　32只雄性SD大鼠，體重180±20 g克，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組，正常對照組12只，給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)；造模組12只，治療組8只，均給予高脂飼料喂養(yǎng)(88％

6、普通飼料+5％蛋黃粉+1％膽固醇+10％豬油)。實(shí)驗(yàn)動物均分籠(每籠4只)飼養(yǎng)于25±2℃、明暗各12h的動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。自由飲水進(jìn)食，于喂飼12周末取對照組和模型組各4只處死，行肝組織HE染色確定大鼠非酒精性脂肪肝模型成功。自13周開始治療組給予雙歧桿菌三聯(lián)活菌腸溶膠囊(0.113g·kg-1·d-1)灌胃，對照組及模型組給予等容量蒸餾水灌胃。每周記錄動物體重1次，根據(jù)體重變化調(diào)節(jié)灌胃計量，連續(xù)進(jìn)行至16周末給藥期結(jié)束，處死全部大鼠。<

7、br>　　2指標(biāo)檢測：
　　(1)觀察肝臟的大體情況，并完整切除肝臟，稱肝臟濕重(2)進(jìn)行肝組織切片的HE染色觀察肝臟病理變化(3)采用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，總膽固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白水平。(4)鱟試劑法測定血清內(nèi)毒素水平(5)熒光定量PCR法檢測肝組織PPRAα mRNA基因水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1給予高脂飲食的大鼠于喂飼12周末出現(xiàn)肝臟脂肪變及炎癥細(xì)胞浸潤，表明高脂飲食成功制

8、造了NASH大鼠模型。
　　2大鼠體重、肝濕重及肝臟指數(shù)(肝濕重/體重×100％)
　　于12周末對部分大鼠肝組織行HE染色確定成功復(fù)制大鼠NASH模型。其余大鼠于16周末再次稱重，模型組大鼠的體重(570.85±13.41)，肝重(19.81±2.47)，肝指數(shù)(2.55±0.16％)均明顯高于正常對照組的體重(507.43±11.65)、肝重(12.91±0.78)及肝指數(shù)(3.48±0.46)(P值均<0.01)，有顯

9、著性差異。與模型組相比，治療組體重(238.58±15.24)、肝重(15.37±1.23)及肝指數(shù)(2.93±0.22％)均明顯降低(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3血清生化指標(biāo)：
　　(1)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)：模型組AST為(204.88±18.22)較正常組(157.88±17.60)顯著增高(P<0.01)，而治療組AST為(183.00±18.47)，較模型組下降(P<0.05)。

10、模型組ALT(71.00±8.73)較正常組(41.00±7.43)顯著增高(P<0.01)，而治療組ALT為(45.88±15.06)較模型組顯著下降(P值<0.01)。
　　(2)血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL)：模型組血清TG為(0.60±0.08)較正常組(0.31±0.08)顯著升高(P<0.01)，治療組TG為(0.50±0.09)較模型組下降(P<0.05)；模型組血清TC為(1.

11、20±0.18)較正常組(0.68±0.16)顯著升高(P<0.01)，治療組TC為(1.02±0.17)較模型無顯著性差異(P均>0.05)；模型組HDL(0.65±0.06)較正常組(0.82±0.08)顯著下降(P<0.01)，而治療組HDL為(0.73±0.06)，較模型組有所上升(P均<0.05)。
　　4血清內(nèi)毒素水平及肝組織PPARα mRNA表達(dá)水平
　　模型組血清內(nèi)毒素水平為(0.24±0.02)低于正常對

12、照組(0.12±0.01)(P<0.01)，治療組血清內(nèi)毒素水平為(0.17±0.02)較造模組血清內(nèi)毒素水平明顯下降(P<0.01)。
　　正常對照組大鼠肝組織高表達(dá)PPARαmRNA(1.62±0.35)；造模組肝組織PPARα mRNA表達(dá)(0.66±0.25)較正常對照組顯著減少(P<0.01)；治療組PPARαmRNA表達(dá)(0.10±0.23)較模型組有所增強(qiáng)(P<0.05)，但較正常組下調(diào)(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)

13、意義。
　　5肝臟病理學(xué)改變
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束時對大鼠肝組織行HE染色正常組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)無脂肪變性，且均無炎癥細(xì)胞的浸潤；于光鏡下觀察模型組大鼠12周末肝組織可見彌漫性的肝細(xì)胞脂肪變性，伴有少量炎癥細(xì)胞浸潤。而后隨著造模時間的延長，脂肪變程度逐漸加重，于16周末脂肪變程度以重度為主，以中央靜脈周圍組織脂肪變最明顯，還可見到程度不等的小葉內(nèi)炎癥，匯管區(qū)炎癥及點(diǎn)灶狀壞死，與正常組相比有顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比，治療組

14、肝細(xì)胞脂肪變性程度較模型組明顯改善(P<0.01)；治療組炎癥分級較模型組無明顯改善(P>0.01)。
　　結(jié)論：
　　1高脂飲食可成功建立大鼠NASH模型。
　　2小腸細(xì)菌過度生長及腸源性內(nèi)毒素在NAFLD發(fā)病過程中可能起到了重要作用，且內(nèi)毒素可能通過影響PPARα mRNA的表達(dá)對肝臟脂質(zhì)代謝進(jìn)行調(diào)節(jié)，這一發(fā)現(xiàn)對深入認(rèn)識NAFLD的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。
　　3微生態(tài)制劑可顯著減輕NAFLD大鼠肝細(xì)胞脂肪變，