淋巴細胞凋亡異常在特發(fā)性血小板減少性紫癜中的作用.pdf

1、特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是一種常見的自身免疫性疾病，臨床上按照病程是否超過6個月分為急性型(AITP)和慢性型(CITP)兩種，兒童時期以AITP多見，其發(fā)病機制至今尚未完全闡明。近年來研究表明ITP患者體內(nèi)激活的淋巴細胞凋亡不足可能在疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。 細胞凋亡是細胞按既定程序主動結(jié)束生命的一種死亡形式，它主要是由死亡受體信號(主要是Fa

2、s/FasL系統(tǒng))調(diào)控的細胞外凋亡途徑和由Bcl-2基因家族調(diào)控的細胞內(nèi)凋亡途徑調(diào)節(jié)的。干預(yù)淋巴細胞凋亡的調(diào)節(jié)過程可以通過誘導(dǎo)淋巴細胞凋亡而起到治療作用，因而針對ITP時凋亡調(diào)控系統(tǒng)各環(huán)節(jié)的研究有重要意義。本實驗旨在探討AITP患兒外周血淋巴細胞凋亡率與凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax比值及其與血小板計數(shù)的關(guān)系，以進一步了解ITP的發(fā)病機制，為臨床治療提供理論依據(jù)。 材料與方法： 1.對象：選擇鄭州大學(xué)第一

3、附屬醫(yī)院2005年3月～8月兒科門診及病房的AITP患兒25例，其中男17例，女8例，年齡1.2歲～11歲(平均4.3歲)，診斷均符合急性特發(fā)性血小板減少性紫癜診斷標準。另選擇健康體檢兒童15例作為對照組，其中男8例，女7例，年齡3～10歲(平均5.6歲)。 2.淋巴細胞的分離及涂片的制備：治療前的AITP患兒及體檢兒童各采靜脈血4ml，以EDTA抗凝，等量PBS液混勻，緩慢平鋪于Ficoll淋巴細胞分離液(二者比例為2：1)表

4、面，以2000r/min速度離心20分鐘，分離出淋巴細胞，用PBS液洗滌兩次，制成細胞懸液，涂片備用。 3.淋巴細胞凋亡率檢測：用原位細胞凋亡方法(TUNEL法)檢測淋巴細胞凋亡率，顯微鏡下隨機計數(shù)500個細胞，得到淋巴細胞凋亡百分率。 4.凋亡蛋白Bcl-2及Bax陽性表達率檢測：用免疫組化方法檢測凋亡蛋白Bcl-2及Bax陽性率，顯微鏡下隨機計數(shù)500個細胞，得到凋亡蛋白Bcl-2和Bax陽性表達率。 5.統(tǒng)

5、計學(xué)分析：全部數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理，結(jié)果用均數(shù)±標準差(-x±s)表示，AITP患兒與正常對照組采用成組設(shè)計的t檢驗，兩變量相關(guān)關(guān)系采用直線相關(guān)分析。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義的標準。 結(jié)果： 1.外周血淋巴細胞凋亡率：AITP患兒治療前外周血淋巴細胞凋亡率為(3.70±0.74)％，正常對照組偶見凋亡淋巴細胞。 2.外周血淋巴細胞Bcl-2蛋白陽性表達率的比較：AITP患兒外周血淋巴細

6、胞Bcl-2蛋白陽性表達率為(59.02±3.99)％，正常對照組為(17.12±3.15)％，AITP患兒明顯高于正常對照組(t=34.606，P=0.000)。 3.外周血淋巴細胞Bax蛋白陽性表達率的比較：AITP患兒外周血淋巴細胞Bax蛋白陽性表達率為(8.39±1.74)％，正常對照組為(9.92±1.83)％，AITP患兒較正常對照組減低(t=2.638，P=0.012)。 4.外周血淋巴細胞Bcl-2/Ba

7、x比值的比較：AITP忠兒外周血淋巴細胞Bcl-2/Bax比值為(7.40±1.88)，正常對照組為(1.84±0.69)，AITP患兒顯著高于正常對照組(t=10.991，P=0.000)。 5.相關(guān)性分析：AITP患兒淋巴細胞凋亡率與血小板計數(shù)呈明顯對數(shù)正相關(guān)(r=0.598，P=0.002)，AITP患兒淋巴細胞凋亡率與Bcl-2蛋白陽性率呈明顯負相關(guān)r=-0.812，P=0.000)，與Bax蛋白呈明顯正相關(guān)(r=0.8

8、08，P=0.000)，與Bcl-2/Bax比值呈明顯負相關(guān)(r=-0.799，P=0.000)。 結(jié)論： 1.AITP患兒體內(nèi)活化的淋巴細胞凋亡減少，導(dǎo)致大量活化淋巴細胞存留體內(nèi)，其中的B淋巴細胞可產(chǎn)生抗血小板抗體，破壞血小板，而T淋巴細胞可產(chǎn)生細胞因子導(dǎo)致免疫功能紊亂，加重自身免疫病。 2.AITP患兒外周血淋巴細胞Bcl-2蛋白表達增高，Bax蛋白表達減低，Bcl-2/Bax比值升高，抑凋亡蛋白表達的增高和