白細(xì)胞介素-6誘導(dǎo)相關(guān)新基因的功能研究.pdf

1、細(xì)胞因子是免疫和造血系統(tǒng)中細(xì)胞間的信號傳遞分子.這些因子通過與靶細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合來表達其生物功能.白細(xì)胞介素-6(IL-6)是一種多功能的細(xì)胞因子,對造血干細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,巨核細(xì)胞,什細(xì)胞具有促進生長、誘導(dǎo)分化的功能.其作用于敏感細(xì)胞時,必將導(dǎo)致一些基因的表達,克隆這些基因,必將有助于進一步闡明IL-6信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及信號分子的作用機制,同時也將有助于進一步闡明IL-6與某些疾病的相關(guān)性.1.IL-6相關(guān)EST的電子克隆,候選新基因

2、的釣取及生物信息學(xué)分析;利用Siclone軟件包對5個該研究室保存的在Genebank上注冊的IL-6作用相關(guān)的EST進行了電子克隆.利用Goldkey軟件對EST及電子克隆(E-clone)結(jié)果進行比對分析,明確EST在eclone中的插入部位及其相似率,以判斷EST序列是否被有效克隆.2.功能未知新基因LX3的表征特征分析及細(xì)胞定位的研究;為進一步研究LX3基因與IL-6作用的相關(guān)性,采用半定時RT-PCR法分別對LX3與IL-6進

3、行了不同作用時間和不同IL-6作用劑量的研究,結(jié)果時間表達譜和劑量表達譜都顯示了LX3和IL-6的作用密切相關(guān).3.人功能未知基因LX3的原核表達、純化及功能的初步研究;為驗證生物信息學(xué)及實驗生物學(xué)預(yù)測的LX3基因表達蛋白質(zhì)的可能功能.構(gòu)建了克隆載體pGEM-T easy/LX3,DNA測序正確后亞克隆到帶有6個His標(biāo)簽的原核高效融合表達載體pET28a(+)上,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21和JM109.進行pET28a(+)/LX3的融合

4、表達研究及表達條件的優(yōu)化.結(jié)論:1.國際上首次釣取了IL-6誘導(dǎo)相關(guān)的新基因LX3,證明了電子克隆技術(shù)對于發(fā)現(xiàn)新基因具有重要意義.信息學(xué)分析表明LX3基因與外周結(jié)合蛋白超家族中的成員2GBP功能上最接近.2.新基因LX3在睪丸、脾臟組織中高表達,而在胃、腦中表達較低.并證明了LX3基因編碼的蛋白質(zhì)在細(xì)胞中為全細(xì)胞分布.3.在大腸桿菌BL21中成功表達了新基因LX3所編碼的蛋白質(zhì),并獲得了純度達90﹪的LX3蛋白純品.4.功能研究表明LX