NB-UVB對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞角蛋白17表達(dá)的調(diào)控作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的銀屑病是一種臨床常見(jiàn)的易復(fù)發(fā)的慢性炎性皮膚病,其發(fā)病率較高,全球發(fā)病率約為0.1-4.0％。目前銀屑病的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,與環(huán)境和遺傳等多種因素有關(guān)。以往研究發(fā)現(xiàn)銀屑病相關(guān)角蛋白17(K17)在銀屑病皮損區(qū)呈特異性高表達(dá),并且通過(guò)“K17-T細(xì)胞-細(xì)胞因子”自身免疫環(huán)路的形式參與銀屑病的發(fā)病和疾病的進(jìn)展。窄譜中波紫外線(NB-UVB)是臨床常用的治療銀屑病的方法,具有安全、有效、副作用小的特點(diǎn)。NB-UVB治療銀屑病的作用機(jī)制可

2、能與誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡有關(guān),但NB-UVB對(duì)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的具體作用,尤其對(duì)K17表達(dá)的影響尚不清楚,本研究通過(guò)體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)探討不同劑量NB-UVB對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞K17表達(dá)的調(diào)控作用及其機(jī)制。
　　方法：不同劑量 NB-UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞系,照射后培養(yǎng)12h用AnnexinV/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡,照射后6、12、24h用CCK8法測(cè)定細(xì)胞活性,透射電鏡觀察細(xì)胞骨架變化,Real-time PCR和Western-blot用于

3、檢測(cè)K17 mRNA和蛋白表達(dá)影響以及其對(duì)ERK1/2、STAT3、STAT1、P38、AKT、P65磷酸化活性的影響;分離培養(yǎng)原代角質(zhì)形成細(xì)胞,采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western印跡以及K17免疫熒光等方法對(duì)以上結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;采用咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病樣皮炎小鼠模型,H&E染色檢測(cè)不同劑量NB-UVB照射后表皮病理變化,熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western印跡、K17免疫熒光和免疫組化檢測(cè)NB-UVB對(duì)小鼠表皮組織K17 mRNA和蛋白

4、表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：細(xì)胞凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞耐受NB-UVB劑量范圍為0-400mJ/cm2,該劑量范圍內(nèi)進(jìn)一步行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)低劑量(100mJ/cm2)NB-UVB照射可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和K17表達(dá),而高劑量(400 mJ/cm2)NB-UVB照射則具有抑制細(xì)胞增殖和K17表達(dá)的作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05和P<0.05)。通過(guò)對(duì)NB-UVB照射后相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行篩查,發(fā)現(xiàn)100 mJ/cm2 NB

5、-UVB照射可以上調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞 ERK1/2、STAT3的磷酸化水平,而400mJ/cm2 NB-UVB照射后ERK1/2、STAT3的磷酸化水平明顯下降,阻斷這一信號(hào)通路可以抑制低劑量NB-UVB對(duì)K17的上調(diào)。不同劑量NB-UVB照射對(duì)原代角質(zhì)形成細(xì)胞K17表達(dá)影響與HaCaT細(xì)胞系結(jié)果一致;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選出BALB/C小鼠NB-UVB的最小紅斑量(MED)為350mJ/cm2,分別予低劑量(100mJ/cm2隔日一次)和高劑量(3

6、00mJ/cm2為初始照射劑量,隔日照射一次,每次增加50mJ/cm2,累計(jì)劑量1500 mJ/cm2)NB-UVB照射,高劑量NB-UVB照射后表皮角化過(guò)度、角化不全等病理變化得到改善,K17表達(dá)明顯減低,低劑量NB-UVB照射對(duì)皮損改善和K17表達(dá)無(wú)明顯影響。
　　結(jié)論：低劑量NB-UVB照射可刺激角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和K17表達(dá),而較高劑量NB-UVB照射則抑制細(xì)胞增殖和K17表達(dá),低劑量NB-UVB引起K17表達(dá)的上調(diào)現(xiàn)象受到

7、ERK1/2及STAT3通路的調(diào)控,而高劑量NB-UVB則抑制ERK1/2及STAT3的活化,引起K17表達(dá)的進(jìn)一步降低,不同劑量NB-UVB照射可引起角質(zhì)形成細(xì)胞截然相反的生物學(xué)行為改變,這一現(xiàn)象與信號(hào)通路的狀態(tài)相關(guān)。臨床NB-UVB治療銀屑病常以最小紅斑量的50-70%為起始劑量,當(dāng)NB-UVB大于臨床起始照射劑量,可以抑制細(xì)胞增殖及K17表達(dá),而低于臨床起始照射劑量時(shí),不能起到抑制細(xì)胞增殖和K17表達(dá)的作用,與本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。