瞬時受體電位錨蛋白1對角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬功能影響的研究.pdf

1、背景:
　　眾所周知紫外線為黃褐斑等色素沉著性皮膚病的主要病因之一，亦是白癜風(fēng)等色素脫失性皮膚黏膜疾病發(fā)病的誘因及治療手段之一。紫外線暴露后的治療策略多集中于黑素細(xì)胞增殖及黑素合成等中下游環(huán)節(jié)，而針對其始動環(huán)節(jié)的靶向治療較少。
　　瞬時受體電位錨蛋白1（Transient Receptor Potential Ankyrin1，TRPA1）作為一種非選擇性鈣離子滲透型通道參與細(xì)胞的多種生命活動。近年來有研究表明在表皮黑素細(xì)胞

2、中，紫外線激活TRPA1通道增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流，促進(jìn)早期的黑素合成。Bellono等研究團(tuán)隊(duì)提出了TRPA1可能是唯一的眼外光轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的理論。在表皮細(xì)胞中，黑素細(xì)胞產(chǎn)生的黑素并通過吞噬向角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。此外，研究表明鈣離子在細(xì)胞吞噬的過程中起著重要的作用。因此研究TRPA1光轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的作用及其機(jī)制，對于深入了解紫外線相關(guān)色素障礙性皮膚病發(fā)病機(jī)制及調(diào)節(jié)黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的上游機(jī)制具有重要意義。
　　目的:
　

3、　1.明確瞬時受體電位錨蛋白l在角質(zhì)形成細(xì)胞中的光轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。
　　2.探討瞬時受體電位錨蛋白1對角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬功能的影響。
　　方法:
　　1.瓊脂糖凝膠電泳、實(shí)時熒光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，qPCR)檢測人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞系(HaCaT細(xì)胞)有TRPA1基因的表達(dá)。
　　2.Western Blot法檢測HaCaT細(xì)胞中T

4、RPA1蛋白的表達(dá)。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測到UVA、UVB照射后，HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流，以及激動或拮抗TRPA1后，HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流。
　　4.激光共聚焦顯微技術(shù)檢測UVA、UVB照射后，TRPA1通道對HaCaT細(xì)胞吞噬功能的影響。
　　結(jié)果:
　　1.瓊脂糖凝膠電泳、qPCR和Western Blot檢測到HaCaT細(xì)胞中有TRPA1基因及蛋白的表達(dá)。
　　2.

5、在UVA或者UVB的照射下，流式細(xì)胞儀檢測HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流顯著增高。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測激動TRPA1通道HaCaT細(xì)胞鈣離子的內(nèi)流顯著增高，在UVA或者UVB的照射下，拮抗TRPA1通道HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流顯著降低。
　　4.流式細(xì)胞儀檢測激動TRPA1通道HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著增多，在UVA或者UVB的照射下，拮抗TRPA1通道HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著