瞬時受體電位錨蛋白1對角質(zhì)形成細胞吞噬功能影響的研究.pdf

1、背景:
　　眾所周知紫外線為黃褐斑等色素沉著性皮膚病的主要病因之一，亦是白癜風等色素脫失性皮膚黏膜疾病發(fā)病的誘因及治療手段之一。紫外線暴露后的治療策略多集中于黑素細胞增殖及黑素合成等中下游環(huán)節(jié)，而針對其始動環(huán)節(jié)的靶向治療較少。
　　瞬時受體電位錨蛋白1（Transient Receptor Potential Ankyrin1，TRPA1）作為一種非選擇性鈣離子滲透型通道參與細胞的多種生命活動。近年來有研究表明在表皮黑素細胞

2、中，紫外線激活TRPA1通道增加細胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流，促進早期的黑素合成。Bellono等研究團隊提出了TRPA1可能是唯一的眼外光轉導通路的理論。在表皮細胞中，黑素細胞產(chǎn)生的黑素并通過吞噬向角質(zhì)形成細胞轉運。此外，研究表明鈣離子在細胞吞噬的過程中起著重要的作用。因此研究TRPA1光轉導通路在表皮角質(zhì)形成細胞中的作用及其機制，對于深入了解紫外線相關色素障礙性皮膚病發(fā)病機制及調(diào)節(jié)黑素小體轉運的上游機制具有重要意義。
　　目的:
　

3、　1.明確瞬時受體電位錨蛋白l在角質(zhì)形成細胞中的光轉導作用。
　　2.探討瞬時受體電位錨蛋白1對角質(zhì)形成細胞吞噬功能的影響。
　　方法:
　　1.瓊脂糖凝膠電泳、實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，qPCR)檢測人永生化角質(zhì)形成細胞系(HaCaT細胞)有TRPA1基因的表達。
　　2.Western Blot法檢測HaCaT細胞中T

4、RPA1蛋白的表達。
　　3.流式細胞儀檢測到UVA、UVB照射后，HaCaT細胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流，以及激動或拮抗TRPA1后，HaCaT細胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流。
　　4.激光共聚焦顯微技術檢測UVA、UVB照射后，TRPA1通道對HaCaT細胞吞噬功能的影響。
　　結果:
　　1.瓊脂糖凝膠電泳、qPCR和Western Blot檢測到HaCaT細胞中有TRPA1基因及蛋白的表達。
　　2.

5、在UVA或者UVB的照射下，流式細胞儀檢測HaCaT細胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流顯著增高。
　　3.流式細胞儀檢測激動TRPA1通道HaCaT細胞鈣離子的內(nèi)流顯著增高，在UVA或者UVB的照射下，拮抗TRPA1通道HaCaT細胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流顯著降低。
　　4.流式細胞儀檢測激動TRPA1通道HaCaT細胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著增多，在UVA或者UVB的照射下，拮抗TRPA1通道HaCaT細胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著