半胱氨酰白三烯受體對BV2細胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:觀察半胱氨酰白三烯(CysLT)受體（CysLT1R和CysLT2R）對小鼠BV2小膠質(zhì)細胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用，并初步探討CysLT受體兩種亞型之間是否存在相互作用。
　　方法:
　　1.采用CysLT受體激動劑（LTD4和NMLTC4）和小膠質(zhì)細胞激活劑（LPS和IFN-γ）作用一定時間，以免疫熒光法和流式細胞術(shù)檢測BV2細胞吞噬功能的變化。
　　2.CysLT1R選擇性拮抗劑montelukast和CysLT

2、2R選擇性拮抗劑HAMI3379預處理30 min后，檢測對激動劑或激活劑引起的吞噬功能變化的作用。
　　3.以Western blotting法檢測LPS和IFN-γ引起的CysLT1R及CysLT2R表達的變化，以及montelukast和HAMI3379對LPS引起的表達變化的影響。
　　4.以免疫熒光共染法檢測CysLT受體激動劑LTD4和NMLTC4以及LPS是否引起CysLT1R和CysLT2R分布的變化;在確定

3、的作用時間點，用激光共聚焦顯微鏡進行初步驗證。
　　結(jié)果:
　　1.免疫熒光法和流式細胞術(shù)都表明，CysLTs受體激動劑LTD4和NMLTC4以及小膠質(zhì)細胞激活劑LPS和IFN-γ，均增強BV2細胞吞噬功能。
　　2.Montelukast和HAMI3379能對抗BV2細胞吞噬功能的增強。Montelukast(0.1μmol/L)和HAMI3379（1μmol/L）均顯著抑制LTD4誘導的吞噬增強;monteluka

4、st（0.1-1μmol/L）和HAMI3379(1μmol/L)均明顯抑制NMLTC4誘導的吞噬增強，且montelukast作用強于HAMI3379。Montelukast和HAMI3379(1μmol/L)均顯著抑制小膠質(zhì)細胞激活劑LPS誘導的吞噬增強。
　　3.LPS和IFN-γ均上調(diào)BV2細胞的CysLT1R和CysLT2R表達，其中，IFN-γ使CysLT1R表達僅有增加趨勢，而CysLT2R表達明顯增加;LPS顯著增

5、加CysLT1R和CysLT2R的表達，且該作用能被montelukast和HAMI3379所拮抗。
　　4.BV2細胞激活導致CysLT1R和CysLT2R分布的變化，CysLT1R與CysLT2R存在共定位，激活后發(fā)生內(nèi)移的特點與時間基本一致。
　　結(jié)論:
　　1.CysLT1R和CysLT2R共同參與BV2細胞激活的調(diào)節(jié)，表現(xiàn)為細胞吞噬功能增強以及CysLT1R和CysLT2R表達增加，特異性拮抗劑使用后上述現(xiàn)象