慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾GDNF表達(dá)對(duì)大鼠乳腺癌致骨癌痛療效的研究.pdf

1、背景：骨癌痛在臨床上很常見，但機(jī)制尚不明確，目前的臨床治療手段多為藥物治療，遠(yuǎn)不能滿足患者的需求，學(xué)者們轉(zhuǎn)而尋求生物治療。本研究旨在探索骨癌痛的發(fā)生機(jī)制，以期尋求新的鎮(zhèn)痛方法。
　　目的：
　　1)復(fù)制大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動(dòng)物模型；
　　2)構(gòu)建膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF) shRNA慢病毒重組體；
　　3)研究shRNA-GDNF對(duì)乳腺癌致骨轉(zhuǎn)移癌痛的療效；
　　4)研究shRNA-GDNF鎮(zhèn)

2、痛的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1)復(fù)制大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動(dòng)物痛模型，從疼痛行為學(xué)、骨損害形態(tài)學(xué)的角度來(lái)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)模型；
　　2)設(shè)計(jì)、構(gòu)建慢病毒包裝的RNA干擾 GDNF重組體；
　　3)選擇骨癌痛模型復(fù)制成功的大鼠行鞘內(nèi)置管，隨機(jī)分為四組，分別給予鞘內(nèi)注射：生理鹽水；慢病毒包裝的RNA干擾GDNF重組體(psiHIV-GDNF-mU6)；慢病毒空載體(psiHIV-U6)；以及嗎啡。比較給藥前、后7d、1

3、4d時(shí)的大鼠熱痛閾、機(jī)械痛閾的變化。
　　4)應(yīng)用免疫熒光染色、RT-PCR及Western-blot等技術(shù)檢測(cè)GDNF及星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP、疼痛相關(guān)調(diào)質(zhì)P物質(zhì)（SP）、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)和疼痛下游信號(hào)分子PERK、c-fos的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1)大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動(dòng)物模型復(fù)制成功；
　　2)慢病毒包裝的RNA干擾GDNF重組體構(gòu)建成功；
　　3)注藥后7d時(shí)，各組機(jī)械痛

4、結(jié)果無(wú)差異。注藥后14d時(shí)，Lv-shRNA-GDNF組、嗎啡組機(jī)械痛閾值明顯較生理鹽水組及空載體對(duì)照組延長(zhǎng)。注藥后7d、14d時(shí)Lv-shRNA-GDNF組與嗎啡組溫痛覺(jué)閾值較生理鹽水組及空載體對(duì)照組明顯延長(zhǎng)。
　　4)骨癌痛大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞顯著活化，GFAP在生理鹽水組及空載體組表達(dá)增高，Lv-shRNA-GDNF組與嗎啡組表達(dá)下降至正常水平。
　　5) GDNF RNA干擾表達(dá)有效，GDNF表達(dá)水平顯著下降，Lv-

5、shRNA-GDNF組與嗎啡組鎮(zhèn)痛效果相似。
　　6)疼痛相關(guān)分子SP、CGRP、c-fos以及 PERK呈現(xiàn)一致變化趨勢(shì)，在生理鹽水組及空載體組表達(dá)增高，Lv-shRNA-GDNF組與嗎啡組表達(dá)下降至正常水平。
　　結(jié)論：
　　1)大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動(dòng)物模型是有效的骨癌痛模型，同時(shí)再現(xiàn)了骨癌痛骨破壞和疼痛行為學(xué)變化的特點(diǎn)。
　　2)骨癌痛大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞顯著活化。
　　3)慢病毒包裝的RNA干擾