苦瓜種質(zhì)資源的ISSR分析.pdf

1、苦瓜(Momordica charantia L.)屬葫蘆科苦瓜屬，在我國已有幾百年的栽培歷史。以福建、廣東、廣西、臺(tái)灣、湖南、四川等地栽培較為普遍，是我國南方重要特色蔬菜之一。現(xiàn)有研究主要集中在栽培、管理、生理、藥用成分提取等方面的研究，在分子生物學(xué)方面的研究較少。本試驗(yàn)運(yùn)用ISSR分子標(biāo)記，對(duì)48個(gè)苦瓜樣品的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。主要結(jié)論如下： 1.結(jié)合苦瓜材料多酚類化合物和多糖等物質(zhì)導(dǎo)致DNA提取困難的特點(diǎn)，對(duì)CTAB法進(jìn)

2、行改良，提出了一套提取高質(zhì)量苦瓜DNA的方法。從苦瓜嫩葉提取的DNA適宜作為苦瓜ISSR分析。 2.借鑒其它作物的研究成果，采用單因素優(yōu)化與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)相結(jié)合的方法優(yōu)化了ISSR擴(kuò)增體系。在20 μL的反應(yīng)體系中，含2μL的10×Buffer(含Mg2+)，30 ng模板DNA，引物濃度為0.5 μmol/L，dNTP的濃度為250 μmol/L，TaqDNA聚合酶的用量為1.25 U。按照此體系，在94℃預(yù)變性5 min，94

3、℃變性30 s，在退火溫度下退火60 s，72℃延伸90 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后72℃延伸10min。該體系擴(kuò)增的譜帶清晰，能滿足苦瓜的ISSR分析。 3.從96條隨機(jī)引物中篩選出14條ISSR引物，對(duì)48個(gè)苦瓜樣品進(jìn)行了ISSR分析，共擴(kuò)增出181條帶，其中多態(tài)性為113條，多態(tài)性百分率為60.32％，同時(shí)研究中發(fā)現(xiàn)ISSR引物中含有(GA)n、(AG)n序列的在苦瓜上擴(kuò)增出的多態(tài)性較高，說明苦瓜基因組中(CT)n/(