精原細胞瘤相關(guān)基因表達與Stat3信號途徑的相關(guān)性及其意義.pdf

1、目的：為了揭示精原細胞瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制，探討腫瘤分子病理改變與病理形態(tài)學和臨床生物學行為之間的關(guān)系，進而為在臨床上開辟以針對STAT3為靶點的治療精原細胞瘤的新方法提供必要的理論依據(jù)。本課題通過檢測信號傳導與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）蛋白的表達，評價信號傳導在睪丸精原細胞瘤發(fā)生中所起的誘導和促進作用；檢測VEGF和c-myc的表達，研究在精原細胞瘤發(fā)生過程中JAK/STAT3信號轉(zhuǎn)導途徑促進腫瘤細胞增殖作用；檢測hiwimRNA和

2、Bcl-xl蛋白表達，探究在腫瘤發(fā)展中STAT3/Bcl-xl抗凋亡作用。通過對Oct4、PLAP和p53基因表達的觀察，探討精原細胞瘤惡變過程中癌基因、抑癌基因的變化，為精原細胞瘤的早期鑒別診斷和治療提供分子生物學依據(jù)。通過檢測睪丸精原細胞瘤組織激素受體，如AR、ER-α和PR表達，研究激素受體與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，進而為精原細胞瘤的內(nèi)分泌治療積累實驗證據(jù)。
　　方法：應用免疫組織化學S-P法，檢測STAT3、VEGF、C-myc

3、、Bcl-xl、p53、AR、ER-α、PR、Oct4和PLAP基因蛋白在睪丸精原細胞瘤和正常睪丸組織中的表達；應用mRNA原位分子雜交技術(shù)，檢測HIWI基因和AR基因在睪丸精原細胞瘤中的轉(zhuǎn)錄情況；采用飽和酚-氯仿抽提石蠟組織DNA，應用PCR-SSCP法，檢測p53在睪丸精原細胞瘤中的突變及缺失情況。
　　結(jié)果：在38例睪丸精原細胞瘤組織中STAT3蛋白表達于細胞核或細胞漿內(nèi)。VEGF、C-myc和Bcl-xl蛋白表達于細胞漿內(nèi)

4、。四種蛋白陽性表達率分別為76.3％、71.1%、84.2%和71.1%，與10例正常睪丸組織中相應基因的表達均具有顯著性統(tǒng)計學差異（p＜0.01）,且上述基因與精原細胞瘤的TNM臨床分期具有相關(guān)性。
　　HIWI mRNA在睪丸精原細胞瘤中表達于腫瘤細胞核和部分細胞漿內(nèi)。其陽性表達率為68.4%，與正常睪丸組織相比具有統(tǒng)計學差異（p＜0.05＝，但與臨床分期無關(guān)（p﹥0.05）。
　　STAT3、VEGF、C-myc、HI

5、WI和Bcl-xl基因表達之間存在不同程度的相關(guān)性。STAT3與VEGF、HIWI和Bcl-xl分別呈正相關(guān)（p<0.01）；STAT3與C-myc呈正相關(guān)（p<0.05）；VEGF與C-myc呈正相關(guān)（p<0.05）。HIWI與BCL-xl基因表達之間存在高度相關(guān)性（r=0.594，p<0.01）。
　　Oct4在睪丸精原細胞瘤中表達于腫瘤細胞核，陽性表達率為100%，在正常睪丸組織中不表達；PLAP陽性著色主要位于細胞膜，偶爾

6、見于胞漿。陽性表達率為89.47%，在正常睪丸組織中同樣不表達。同時根據(jù)鏡下觀察，Oct4表達的切片背景色非常低，而PLAP表達的許多切片上，背景色較重。
　　VEGF在睪丸精原細胞瘤臨床分期Ⅰ期的陽性表達率為33.33%，Ⅱ期的陽性表達率為90.91%，Ⅲ期的陽性表達率為100%。Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅰ期與Ⅲ期各組間比較具有顯著性統(tǒng)計學差異（p<0.01），Ⅱ期與Ⅲ期之間比較無統(tǒng)計學差異（p>0.05）；在10例正常睪丸組織中，2例弱陽

7、性，8例陰性。
　　在睪丸精原細胞瘤中p53陽性物質(zhì)見于腫瘤細胞核。臨床Ⅰ期的陽性表達率為93.33%，Ⅱ期與Ⅲ期的表達率分別為54.55%和50%。Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅰ期與Ⅲ期兩組間比較具有統(tǒng)計學差異（p<0.05），Ⅱ期與Ⅲ期之間比較無統(tǒng)計學差異（p>0.05）；10例正常睪丸組織均呈陰性表達。
　　在抽取的11例睪丸精原細胞瘤樣本中，p53基因突變的有5例，突變率為45.45%。其中第5外顯子突變的有3例，第6外顯子突變的有

8、0例，第7外顯子突變的有1例，第8外顯子突變的有1例。p53和VEGF表達之間存在相關(guān)關(guān)系（p<0.05）；p53和STAT3表達之間存在高度相關(guān)性（p<0.01）。
　　在25例睪丸精原細胞瘤組織中，部分腫瘤細胞胞漿中存在AR mRNA與AR蛋白的表達。在AR mRNA陽性和AR蛋白陽性病例中，其陽性細胞面積與總細胞面積比值和 OD值與正常睪丸組織相比均具有統(tǒng)計學差異（p<0.05）。而 ER-α、PR蛋白均呈陰性表達。提示生精

9、組織惡變時，AR mRNA和AR蛋白的表達水平下降。
　　結(jié)論：
　　1. JAK/Stat3信號轉(zhuǎn)導途徑可激活 C-myc的表達，引起生殖細胞的惡性增殖，誘導睪丸精原細胞瘤的發(fā)生與發(fā)展。
　　2. JAK/Stat3信號轉(zhuǎn)導途徑可激活VEGF的表達，進而在睪丸精原細胞瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。
　　3.睪丸精原細胞瘤中，HIWI基因可激活 STAT3/Bcl-xl信號通路，賦予腫瘤細胞自我更新和抗凋亡的能力