慢病毒介導的雙自殺基因靶向治療大腸癌的實驗研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文慢病毒介導的雙自殺基因靶向治療大腸癌的實驗研究姓名：陳海金申請學位級別：博士專業(yè)：普外科指導教師：黃宗海20070601摘要系統(tǒng)的作用機理具有很強的互補性，聯(lián)合應用此兩系統(tǒng)不僅可以提高腫瘤細胞殺傷作用，改善治療效果，而且可以擴大腫瘤治療譜，減少耐藥現(xiàn)象發(fā)生。眾所周知，腫瘤的自殺基因治療雖已成為基因治療中研究熱點之一，但目的基因的靶向性及基因轉(zhuǎn)移的低效率是這～療法廣泛開展的主要障礙實驗研究中大多使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和

2、腺病毒載體進行基因轉(zhuǎn)染治療，與其它幾種常用的病毒載體相比較，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體病毒滴度低，只能感染分裂期細胞，容納外源基因的I)NA片段長度不超過8kb。而腺病毒載體感染細胞時，病毒DNA游離在細胞核內(nèi)，并不整合到染色體上，在體內(nèi)不能實現(xiàn)穩(wěn)定的長期表達，且反復應用容易引起免疫反應，因而在應用上這兩種病毒載體都受到一定的限制。慢病毒載體最大的特點是可以感染分裂期及非分裂期細胞，容納外源性目的基因的片段大，可以在體內(nèi)長期地表達，免疫反應小，安全

3、性較好，可在更多范圍的宿主細胞內(nèi)生成高滴度的病毒，已成為當前基因治療中載體研究的熱點。同時，如能使自殺基因選擇性地作用于目的腫瘤細胞而不在正常細胞中表達，將能使該治療策略更加完善。既往研究利用腫瘤特異性基因調(diào)控元件調(diào)控自殺基因表達，如以erbB2、Q一人乳白蛋白(hALA)啟動子驅(qū)動自殺基因進行乳腺癌基因治療，甲胎蛋白(AFP)基因啟動予用于肝癌自殺基因療法，癌胚抗原(CEA)基因啟動子用于腸道腫瘤自殺基因療法等。上述治療方案中，每一特

4、異啟動子僅能進行針對某一類型腫瘤細胞靶向基因治療，而絕大多數(shù)惡性實體瘤的生物學特性為生長迅速，致使其滋養(yǎng)血管不能及時供應所有腫瘤細胞，該特點使前體藥物難以接近所有腫瘤細胞。選擇一合適啟動子既靶向腫瘤血管內(nèi)皮細胞，又靶向腫痞細胞，如此既可殺傷腫瘤細胞，又可靶向破壞腫瘤滋養(yǎng)血管使得其灌流區(qū)大量腫瘤細胞缺血性壞死，這樣即高效放大了自殺基因的療效。大量研究證明，KDR在正常人體組織中里低水平表達，而在絕大多數(shù)腫瘤中呈現(xiàn)高表達，且KI)R不僅表達