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文檔簡介
1、山東醫(yī)科大學碩士學位論文AntiMUC1(ScFv)靶向的慢病毒高效轉導自殺基因治療卵巢癌的實驗研究姓名:宋莉申請學位級別:碩士專業(yè):婦產科指導教師:孔北華劉春生2000.5.1結果:磷酸鈣沉淀法可有效將上述質粒轉入293T細胞。熒光顯微鏡下觀察到大量綠色熒光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)表達。透射電鏡下觀察到大量濃縮后病毒顆粒,熒光分光光度計檢測到510nm處有一很高的吸收峰,也證實有大量病毒顆粒存在
2、。熒光顯微鏡下觀察到Anti—mileI(ScFv)介導的慢病毒對共培養(yǎng)的SKOV3(mllc1一)和GF(muc1‘)細胞的感染有明顯差別,非Antimuc—l(ScFv)介導的r幔病毒對共培養(yǎng)的SKOV3(muc1)和GF(mUC1‘)的感染末見顯著性差別,證明AntimucI(ScFv)介導的慢病毒可對mile1’的卵巢癌細胞靶向性轉染。病毒感染前加入antimuc1單抗則可抑制病毒靶向性感染。此競爭抑制實驗表明病毒感染是由其抗體
3、組成部分介導,故有抗體導向性。PCR、RTPCR均顯示600bp的陽性條帶,證明HSVtk已在靶細胞SKOV3中整合且轉錄表達。光鏡下觀察到HSVtk轉錄后的細胞在GCV作用后出現(xiàn)明顯形態(tài)變化;MTT法顯示GCV對轉導HSVtk后的SKOV3細胞有顯著殺傷作用,對與之共培養(yǎng)且共轉染的GF則殺傷作用很小,二者IC。有顯著性差異。f/7結論:Anti—mile—I(ScFv)介導的慢病毒可將HSVtl(基因高效、靶向性轉染mac一1卵巢上皮
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