靶向MDR1基因的小分子干擾RNA治療卵巢癌的動(dòng)物體內(nèi)研究.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染靶向MDRl基因的小分子干擾RNA作用于卵巢癌腹水瘤模型中P-gp的過(guò)度表達(dá),進(jìn)一步證實(shí)靶向MDR1基因的小分子干擾RNA體內(nèi)抑制MDR1與P糖蛋白表達(dá)的效果以及對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。
　　 方法：
　　 1.使用熒光標(biāo)記的siRNA檢測(cè)siRNA的轉(zhuǎn)染效率,優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
　　 2.設(shè)計(jì)靶向MDR1基因的三條siRNA/MDR1,并用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染到卵巢癌SKOV3/AR細(xì)

2、胞中,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后使用RT-PCR檢測(cè)MDR1 mRNA的表達(dá),篩選出干擾效率較高的一條siRNA。
　　 3.通過(guò)注射人卵巢癌細(xì)胞SKOV3/AR到裸鼠腹腔建立腹水瘤模型；待裸鼠長(zhǎng)有腹水,然后把荷瘤鼠隨機(jī)分為以下三個(gè)治療組(6只/組):泰素治療組(空白組),泰素和脂質(zhì)體治療組(對(duì)照組),泰素和小分子RNA干擾治療組(治療組),三組均為腹腔注射治療。治療過(guò)程中,每周稱(chēng)量老鼠體重兩次,以此評(píng)價(jià)治療的毒性反應(yīng)。
　　 4.

3、觀察各組老鼠的腫瘤和腹水生長(zhǎng)情況,并分別用半定量PCR和免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定治療后腫瘤組織中MDR1和P糖蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.通過(guò)圖像軟件分析熒光顯微鏡照片顯示:當(dāng)干擾片段濃度為30nM時(shí),siRNA轉(zhuǎn)染效率最高。
　　 2.轉(zhuǎn)染48小時(shí)后各組細(xì)胞MDRl表達(dá)水平:MDR1mRNA在siRNA/MDR1-Ⅰ組、siRNA/MDR1-Ⅱ組、siRNA/MDR1-Ⅲ組、空白組、脂質(zhì)體組及陰性對(duì)

4、照組細(xì)胞的表達(dá)水平依次為1.98±0.03,2.05±0.09,1.45±0.08,3.49±0.28,3.46±0.17和3.48±0.26；同空白組相比,siRNA干擾組MDR1mRNA的表達(dá)水平均有顯著下降(均有P<0.05),其中以siRNA/MDR1-Ⅲ組的下降最明顯,因此選擇對(duì)基因抑制率最高的siRNA/MDR1-Ⅲ進(jìn)行后續(xù)治療實(shí)驗(yàn)。
　　 3.接種細(xì)胞20天后,裸鼠被發(fā)現(xiàn)有腹水。治療結(jié)束后,我們發(fā)現(xiàn)siRNA治療無(wú)

5、明顯毒性反應(yīng),且泰素和小分子干擾RNA治療組老鼠的腫瘤及腹水生長(zhǎng)與其他組相比明顯受到抑制,分別下降了43.6％和29.7％(P<0.001)；泰素和小分子干擾RNA治療組腫瘤組織中MDR1和P糖蛋白的表達(dá)與其他組相比也明顯受到抑制(P<0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 靶向MDR1基因的小分子干擾RNA能夠在體內(nèi)有效而特異性地抑制MDR1及P糖蛋白的表達(dá)和卵巢癌的生長(zhǎng)；小分子RNA干擾技術(shù)有可能成為卵巢癌基因治療的一種