靶向Survivin基因的RNA干擾抑制膀胱癌生長的實驗研究.pdf

1、目的和意義:膀胱癌是我國泌尿生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤，首次確診時多為表淺性。目前對表淺性膀胱癌常規(guī)治療為經(jīng)尿道電切術(shù)(TUR)、術(shù)后輔以膀胱灌注化療或免疫治療。即使如此膀胱癌仍有較高的復發(fā)率，因此開發(fā)新的膀胱內(nèi)灌注藥物是膀胱癌研究的一個方向。Survivin是腫瘤基因治療的潛在靶點，而RNA干擾是近年發(fā)現(xiàn)的高效基因沉默方法。本研究承接前期實驗成果，探討了靶向 Survivin基因的RNA干擾對膀胱癌細胞T24皮下腫瘤生長的影響，以及在原位

2、動物模型中對膀胱癌的治療作用。 方法: (1)構(gòu)建Survivin基因shgNA真核表達載體pRNAT-survivin，轉(zhuǎn)染人膀胱癌細胞T24并獲得穩(wěn)定的單克隆細胞。實時定量PCR檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后T24細胞Survivin mRNA變化，將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的單克隆細胞與未轉(zhuǎn)染的T24細胞分別接種于5只裸鼠皮下，觀察腫瘤生長情況，腫瘤組織行免疫組化檢測Survivin蛋白表達。 (2)直視下經(jīng)尿道機械損傷B

3、ALB/c裸鼠膀胱粘膜，將人膀胱癌T24細胞經(jīng)尿道種植于25只裸鼠膀胱，建立荷人膀胱癌原位動物模型。以Gd-DTPA作為膀胱造影劑，每周取5只裸鼠行MR檢測腫瘤的生長，MR檢查后即取裸鼠膀胱組織標本行HE染色進行病理學檢查。 (3)同法建立膀胱癌動物模型分為4組，每組6只裸鼠，A組：不予任何處理；B組：膀胱灌注濃度0.5 mg，ml的絲裂霉素；C組：膀胱灌注濃度為150μg/ml RNAi-survivin的干擾質(zhì)粒；D組：干擾

4、質(zhì)粒和絲裂霉素交替膀胱灌注；膀胱灌注治療6次后荷瘤膀胱稱重，行病理學檢查及免疫組化檢測膀胱腫瘤Survivin、Caspase-3表達。 結(jié)論: (1)靶向Survivin的shRNA持久地抑制了膀胱癌細胞T24裸鼠皮下移植瘤生長；Survivin基因可作為膀胱癌基因治療的良好靶點。 (2)成功建立了裸鼠原位膀胱癌動物模型，腫瘤生長基本模擬了人膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過程；MR檢查可作為對裸鼠膀胱原位腫瘤動態(tài)觀察的可靠

5、方法。 (3)靶向Survivin的干擾質(zhì)粒膀胱灌注可達到與絲裂霉素相近的效果，兩者交替膀胱灌注可明顯增加絲裂霉素的抗腫瘤作用?？赡軝C制為阻斷膀胱腫瘤Survivin表達引起腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤生長；因與絲裂霉素作用于不同細胞周期增強了膀胱腫瘤對絲裂霉素的化療敏感性。 綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)靶向Survivin的RNA干擾對膀胱癌細胞T24裸鼠皮下及原位移植瘤的抑制作用，結(jié)合前期體外實驗結(jié)論，認為Survivin基因可作