篩選靶向肝癌Bel-7402-ADM細(xì)胞MDR1基因的高效siRNA的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　篩選出靶向人肝癌多藥耐藥細(xì)胞亞系Bel-7402/ADM細(xì)胞MDR1基因的高效siRNA,為逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥提供新的分子靶點(diǎn)。
　　方法：
　　設(shè)計(jì)并化學(xué)合成4條靶向MDR1的siRNAs(mdr1si-1、mdr1si-2、mdrlsi-3和mdrlsi-4),通過(guò)Lipofectamine2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染Bel-7402/ADM細(xì)胞株,用RT-PCR檢測(cè)Bel-7402/ADM細(xì)胞MDR1 mRNA表達(dá)

2、、western blot檢測(cè)P-gp的表達(dá)和MTT檢測(cè)細(xì)胞對(duì)ADM的敏感性,綜合評(píng)價(jià)這4條siRNAs的沉默效果。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)siRNA干擾后,4條siRNAs均能不同程度逆轉(zhuǎn)Bel-7402/ADM細(xì)胞MDR1介導(dǎo)的多藥耐藥。4條siRNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,mdrlsi-1組或mdrlsi-3組的mRNA的表達(dá)水平下降幅度較mdrlsi-4組或mdrlsi-2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);轉(zhuǎn)染72h后P-gp

3、蛋白的表達(dá)量由低到高依次為mdrlsi-1組,mdrlsi-3和mdrlsi-4組, mdrlsi-2組(P<0.05);mdrlsi-1組對(duì)ADM耐藥的相對(duì)逆轉(zhuǎn)率最高,mdrlsi-3組次之(P<0.05),mdrlsi-4組和mdrlsi-2組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　相比較其他3條siRNAs,mdr1si-1對(duì)人肝癌Bel-7402/ADM細(xì)胞MDR1介導(dǎo)的耐藥逆轉(zhuǎn)效果最好,其靶序列有望成