GLP-1在十二指腸空腸旁路術(shù)治療2型糖尿病中作用的研究.pdf

1、第一部分，糖代謝、胃腸激素及腸道內(nèi)分泌細(xì)胞在2型糖尿病造模過程中的變化
　　目的:研究2型糖尿病造模過程中糖代謝指標(biāo)及主要胃腸激素的變化趨勢，關(guān)注腸道內(nèi)分泌細(xì)胞變化，尤其是K細(xì)胞和L細(xì)胞的變化，研究以上變化與胰島素抵抗和胰島素分泌的關(guān)系。
　　方法:將40只8-10周齡雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為2組，造模組采用國際公認(rèn)方案高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)作用于Wistar大鼠來制造2型糖尿

2、病動物模型，對照組采用同等條件下采用普通飼料喂養(yǎng)聯(lián)合STZ進(jìn)行觀察。研究高脂高糖喂養(yǎng)過程中及STZ注射前后糖代謝指標(biāo)（體重、空腹血糖、隨機(jī)血糖、胰島素、GHbA1c、OGTT）的變化，主要胃腸激素（Ghrelin、GIP、胰高血糖素樣肽-1[GLP-1]）的變化，并對KI67陽性細(xì)胞、PDX-1陽性細(xì)胞、GIP陽性細(xì)胞和GLP-1陽性細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光觀察。
　　結(jié)果:高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合STZ成功造模14只，成功率為70.0％。高脂高

3、糖喂養(yǎng)過程中糖代謝指標(biāo)逐漸升高，注射STZ后，糖代謝指標(biāo)大幅度升高，并趨于穩(wěn)定。胃腸激素發(fā)生明顯變化，Ghrelin和GIP水平明顯升高，而GLP-1明顯降低。造模組KI67表達(dá)陽性為53.8±8.9％，增生細(xì)胞主要集聚在絨毛上皮組織內(nèi)，從粘膜層一直延伸到粘膜肌層;對照組KI67表達(dá)陽性為0.7±0.9％。造模組PDX-1陽性細(xì)胞表達(dá)率為76.4±11.2％，陽性細(xì)胞多成團(tuán);而對照組表達(dá)率僅為29.6±9.8％，陽性細(xì)胞多分散。造模組G

4、IP陽性細(xì)胞數(shù)分別為598.2±49.6/mm3，細(xì)胞聚集成團(tuán);實驗組GIP陽性細(xì)胞數(shù)分別為92.5±10.3/mm3，細(xì)胞散落在絨毛上皮內(nèi)。造模組和對照組陽性細(xì)胞數(shù)分別為102.3±19.7/mm3和32.3±18.4/mm3，GLP-1陽性細(xì)胞廣泛出現(xiàn)在粘膜下。
　　結(jié)論:高脂高糖聯(lián)合STZ可成功誘導(dǎo)Wistar大鼠2型糖尿病模型，高脂高糖主要誘導(dǎo)胰島素抵抗，STZ致使胰島B細(xì)胞功能缺陷（胰島素分泌不足）;高脂高糖喂養(yǎng)過程中糖

5、代謝指標(biāo)逐漸升高，注射STZ后，糖代謝指標(biāo)大幅度升高，并趨于穩(wěn)定;造模過程中，PDX-1增加，調(diào)節(jié)K細(xì)胞增生，促使GIP升高，產(chǎn)生胰島素抵抗;造模過程中，L細(xì)胞增生明顯，但GLP-1分泌降低，L細(xì)胞增殖率升高可能是L細(xì)胞功能紊亂的表現(xiàn)。
　　第二部分，十二指腸空腸旁路術(shù)(DJB)對2型糖尿病大鼠糖、脂代謝的影響
　　目的:對GK大鼠、Wistar2型糖尿病大鼠和Wistar大鼠進(jìn)行DJB手術(shù)，觀察DJB手術(shù)的穩(wěn)定，DJB對三

6、組大鼠糖、脂代謝的影響，以及DJB對腸道激素GIP、GLP-1的影響。
　　方法:各取GK大鼠20只，Wistar2型糖尿病大鼠20只，Wistar大鼠20只，按照隨機(jī)區(qū)組分組分為六組，A、B、C三組行DJB手術(shù)，sham-A、sham-B、sham-C行假手術(shù)。觀察六組大鼠的DJB術(shù)后存活率，肝腎功能的變化以評估手術(shù)的穩(wěn)定性;觀察DJB對大鼠體重、空腹血糖、隨機(jī)血糖、GHbA1c、胰島素的影響以評估DJB對2型糖尿病大鼠糖代謝的

7、影響;觀察DJB對大鼠甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、游離脂肪酸(FFA)以評估DJB對脂代謝的影響;同時觀察DJB對腸道激素GIP、GLP-1分泌的影響。
　　結(jié)果:六組大鼠的存活率分別為:A組90.0％，Sham-A組100.0％，B組90.0％，Sham-B組100.0％，C組100.0％，Sham-C組100.0％，六組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。六組大鼠術(shù)前、術(shù)后肝腎功能無明顯差異。糖代謝方面，A組和B組DJB術(shù)后1月、3月空

8、腹血糖、隨機(jī)血糖、GHbA1c明顯低于同組術(shù)前(P＜0.05)，而同組術(shù)后1月和3月之間無明顯差異(P＞0.05);A組術(shù)后1月、3月胰島素明顯高于術(shù)前(P＜0.05)，術(shù)后1月和3月之間無明顯差異(P＞0.05)，而B組術(shù)后胰島素與術(shù)前無明顯差異(P＞0.05);A組與B組同期的數(shù)據(jù)相比，B組術(shù)后1月、3月胰島素明顯低于A組(P＞0.05)。A組和B組DJB術(shù)后3月脂代謝(TG、TC、FFA)、GIP低于同組術(shù)前(P＜0.05)，而兩

9、組之間無顯著差異。A組和B組DJB術(shù)后3月GLP-1明顯高于同組術(shù)前(P＜0.05)，而兩組之間無顯著差異。
　　結(jié)論:DJB是一種安全、有效的治療2型糖尿病大鼠的手術(shù);DJB能明顯改善2型糖尿病大鼠的糖代謝和脂代謝;2型糖尿病大鼠DJB術(shù)后，GIP明顯降低，GLP-1明顯升高，兩者可能是DJB治療2型糖尿病的重要因子。
　　第三部分，GLP-1在DJB治療2型糖尿病中的作用
　　目的:“后腸”假說是DJB治療2型糖尿

10、病的重要機(jī)制，而GLP-1是“后腸”假說的核心。本章主要研究DJB術(shù)后GLP-1的變化對2型糖尿病的影響，以及GLP-1改善2型糖尿病的具體機(jī)制。
　　方法:觀察GLP-1受體激動劑liraglutide和GLP-1受體阻斷劑exendin9-39對DJB術(shù)后大鼠糖代謝、胰島素抵抗、β細(xì)胞功能的影響。觀察DJB聯(lián)合回腸切除術(shù)對2型糖尿病大鼠糖代謝、腸道激素的影響。觀察兩部分實驗對胰腺增生、β細(xì)胞凋亡的影響。并用RT-PCR分析兩部

11、分實驗葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GLUT2)和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)的核酸表達(dá)情況。
　　結(jié)果:liraglutide和exendin9-39顯著影響DJB術(shù)后的胰島素分泌和β細(xì)胞功能，而對胰島素抵抗影響不明顯。DJB聯(lián)合回腸切除術(shù)后，糖代謝指標(biāo)比DJB差，甚至明顯差于術(shù)前;與DJB相比，DJB聯(lián)合回腸切除術(shù)后GIP差異不明顯，GLP-1明顯低于DJB組。胰島增生情況為:DJB術(shù)后胰腺增生明顯;DJB術(shù)后給予GLP-1受體阻斷劑可

12、見胰腺增生情況下降;DJB術(shù)后給予GLP-1受體激動劑可見胰腺增生明顯;而DJB+回腸切除術(shù)后，胰腺明顯萎縮，預(yù)示預(yù)后不良。β細(xì)胞凋亡情況:DJB術(shù)后胰島β細(xì)胞凋亡明顯減少;DJB術(shù)后給予GLP-1受體阻斷劑可見凋亡的β細(xì)胞較DJB術(shù)后明顯增多;DJB術(shù)后給予GLP-1受體激動劑可見β細(xì)胞凋亡大幅度減少，比單純DJB術(shù)后的凋亡細(xì)胞更少;而DJB+回腸切除術(shù)后，凋亡細(xì)胞明顯增多，甚至還出現(xiàn)了細(xì)胞壞死。GK大鼠GLUT2mRNA的表達(dá)由高到