超聲空化效應(yīng)促人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)歸巢的實驗研究.pdf

1、第一部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中環(huán)氧化酶2及聚蛋白多糖酶1沉默與胰島素樣生長因子1表達(dá)
　　【目的】觀察攜帶基因環(huán)氧化酶2、聚蛋白多糖酶1的 shRNA干擾載體和攜帶胰島素樣生長因子1的過表達(dá)慢病毒載體在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　【方法】應(yīng)用重組慢病毒技術(shù)構(gòu)建攜帶沉默基因環(huán)氧化酶2、聚蛋白多糖酶1、過表達(dá)基因胰島素樣生長因子1和綠色熒光蛋白基因的重組慢病毒表達(dá)載體，并用其轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第三代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（實驗組），

2、并以無目的基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和未做處理的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分別作為陰性對照組和空白組進(jìn)行對比。
　　【結(jié)果】慢病毒轉(zhuǎn)染3d后，熒光顯微鏡下可見人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)出綠色熒光，陰性對照組、實驗組轉(zhuǎn)染效率均達(dá)90％以上。RT-PCR、Western blot和ELISA檢測結(jié)果顯示，環(huán)氧化酶2和聚蛋白多糖酶1在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的基因和蛋白水平有受到了明顯抑制，胰島素樣生長因子1基因和蛋白水平的表達(dá)均高于陰性對照組

3、及空白組。
　　【結(jié)論】應(yīng)用慢病毒可在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功沉默環(huán)氧化酶2和聚蛋白多糖酶1基因，同時將胰島素樣生長因子1高表達(dá)，為系統(tǒng)性治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎帶來新的希望。
　　第二部分超聲空化效應(yīng)促人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)歸巢的實驗研究
　　【目的】研究觀察超聲空化效應(yīng)對慢病毒介導(dǎo) hCOX-2 shRNA、hAggrecanse-1shRNA、hIGF-1基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的可行性及干細(xì)胞在兔關(guān)節(jié)炎模型體內(nèi)歸

4、巢的影響。
　　【方法】關(guān)節(jié)炎模型造模成功的新西蘭兔分為3組：轉(zhuǎn)染基因人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+微泡+超聲組（實驗組）、轉(zhuǎn)染基因人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+超聲組（對照組）、轉(zhuǎn)染基因人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+無處理組（空白組），移植細(xì)胞后檢測兔后肢膝關(guān)節(jié)滑膜組織學(xué)觀察及RT-PCR基因檢測。
　　【結(jié)果】超聲空化效應(yīng)可以增加慢病毒介導(dǎo)hCOX-2 shRNA、hAggrecanse-1shRNA、hIGF-1基因轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在兔關(guān)節(jié)炎