2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分
   【研究背景及目的】骨髓間充質(zhì)干細胞是一類具有多能分化潛能的細胞,可以向骨組織,心肌,軟骨組織,肌肉等分化,并且可以特異遷移到損傷部位及腫瘤局部,被認為是具有應(yīng)用前景的基因治療細胞載體。然而,間充質(zhì)干細胞靶向歸巢腫瘤局部的機制卻不太清楚。本研究在于分離人類骨髓間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),并探討其體內(nèi)靶向歸巢腫瘤局部的機制。
   【方法】(1)密度梯度離心法獲得骨

2、髓間充質(zhì)干細胞,并體外培養(yǎng)擴增。(2)流式細胞儀及激光共聚焦顯微鏡檢測骨髓間充質(zhì)干細胞表面標志分子CD44、CD105、CD90、CD34、CD45、CD19;不同條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨分化、軟骨分化及脂肪分化,倒置顯微鏡觀察。(3)建立小鼠原位乳腺腫瘤模型,尾靜脈注射菲力磁(SPIO)體外標記的骨髓間充質(zhì)干細胞,利用冰凍切片對骨髓間充質(zhì)干細胞在小鼠腫瘤局部的分布情況進行檢測。(4)取新鮮乳腺癌組織,剪碎,膠原酶消化成單細

3、胞懸液,細胞標記抗CD31單克隆抗體,免疫磁柱分離抗CD31單克隆抗體陽性細胞,即腫瘤血管內(nèi)皮細胞,并且體外原代培養(yǎng)。(5)流式細胞儀及激光共聚焦顯微鏡檢測腫瘤血管內(nèi)皮細胞標志性分子CD31、CD34、vWF。(6)Transwell模型驗證腫瘤細胞對間充質(zhì)干細胞的體外趨化能力。(7)Transwell模型血管內(nèi)皮細胞對骨髓間充質(zhì)干細胞體外趨化能力,結(jié)晶紫染色,顯微鏡照相,每個濾膜隨機選取5個200倍視野計數(shù)穿膜細胞數(shù),穿膜細胞數(shù)表示骨

4、髓間充質(zhì)干細胞的體外遷移能力。
   【結(jié)果】(1)原代貼壁細胞呈長梭形。體外培養(yǎng)一周,細胞形態(tài)均一,擴增速度快,克隆形成能力強。(2)流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細胞表面分子標志物CD44、CD105、CD90陽性率分別為99.79±3.35%,99.62±3.78%,98.93±3.62%,陰性標志物CD34、CD45、CD19為4.32±1.01%,4.04±1.05%,6.04±0.95%;激光共聚焦顯微鏡下,可見骨髓

5、間充質(zhì)干細胞陽性標志物在細胞內(nèi)存在較高表達。不同的條件培養(yǎng)液成功誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向骨組織、脂肪組織及軟骨組織分化,驗證了骨髓間充質(zhì)干細胞多向分化潛能。(3)體外SPIO標記的骨髓間充質(zhì)干細胞通過尾靜脈注射到荷瘤小鼠體內(nèi),細胞主要聚集在腫瘤局部。(4)免疫磁珠方法分離的腫瘤血管內(nèi)皮細胞,6-12小時貼壁生長,早期細胞呈小多角、球形,逐漸生長成梭形,于3~4d后融合,為單層呈鋪路石狀排列。(5)流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn),CD31、CD34、v

6、WF陽性率分別為92.8±2.32%,99.87±1.95%,86.26±2.57%(6)Boyden小室結(jié)果顯示:在相同時間點,下室接種MDA-MB-231及MDA-MB-435s細胞組與對照組相比,穿膜細胞數(shù)無明顯改變。(7)Boyden小室結(jié)果顯示:腫瘤血管內(nèi)皮細胞組,骨髓間充質(zhì)干細胞穿膜細胞數(shù)明顯多于對照組(p﹤0.05)
   【結(jié)論】體外可獲得較高純度的骨髓間充質(zhì)干細胞,且易于培養(yǎng)擴增。骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)靶向歸巢腫

7、瘤局部的能力與腫瘤局部血管內(nèi)皮細胞有關(guān)。
   第二部分
   目的:研究Snail與宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移間的關(guān)系,并探討其分子機制。
   方法:構(gòu)建正義全長Snail 真核表達載體并轉(zhuǎn)染宮頸癌細胞系Hela、Siha。采用Westernblot 方法分析相關(guān)基因表達,細胞傷痕愈合實驗,Transwell模型穿膜細胞計數(shù)檢測細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。
   結(jié)果:(1)在轉(zhuǎn)染PEGFPC1/Snail的宮頸癌細胞株H

8、ela、SiHa中E-cadherin表達明顯下調(diào),Snail和Vimentin 則表達上調(diào)(p<0.05)。(2)宮頸癌細胞系Hela、Siha 轉(zhuǎn)染正義全長Snail 真核表達載體,12小時細胞傷痕愈合能力顯著提高(p<0.05);轉(zhuǎn)染PEGFPC1/Snail后,Hela、SiHa細胞12小時穿膜細胞數(shù)明顯增多(p<0.05)。Snail過表達可顯著促進宮頸癌細胞株Hela、SiHa的侵襲轉(zhuǎn)移潛能。
   結(jié)論:轉(zhuǎn)錄因子S

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