1,3-甘油二酯安全性評(píng)價(jià)及在大鼠小腸上皮再酯化途徑的研究.pdf

1、目的：
　　對(duì)1，3-甘油二酯(diacylglycerol，DG)的食品安全性進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)，為1，3-DG的開(kāi)發(fā)和利用提供試驗(yàn)依據(jù);通過(guò)分析1，3-DG和甘油三酯(triacylglycerol，TG)在小腸腔和小腸上皮內(nèi)含量的變化，研究1，3-DG在大鼠小腸上皮內(nèi)代謝和再酯化的途徑，探討1，3-DG有利于機(jī)體健康的機(jī)理。
　　方法：
　　按照食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法，分別進(jìn)行如下一系列試驗(yàn):急性毒性試驗(yàn)，用

2、于觀察1，3-DG對(duì)動(dòng)物一般情況的影響;遺傳毒性試驗(yàn)，包括Ames試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)，用于觀察1，3-DG是否對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物遺傳有不良影響;30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，觀察試驗(yàn)期間試驗(yàn)動(dòng)物的一般狀況、體重增加、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)以及病理組織改變等，分析在長(zhǎng)期喂養(yǎng)中1，3-DG對(duì)大鼠的影響。
　　1，3-DG在大鼠小腸上皮內(nèi)代謝和再酯化的途徑研究中，將試驗(yàn)動(dòng)物分為健康對(duì)照組和高甘油三脂血癥模型組。造模成功后，分別用含1，3-D

3、G和TG的飼料進(jìn)行一段時(shí)間的喂養(yǎng)，取材前用1，3-DG或TG乳化液進(jìn)行灌胃，在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)取材，分析大鼠小腸腔內(nèi)和小腸上皮細(xì)胞內(nèi)脂類含量的變化，研究1，3-DG在大鼠小腸上皮內(nèi)再酯化的途徑。
　　結(jié)果：
　　1.急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，1，3-DG對(duì)雌雄小鼠經(jīng)口LD50均大于15000mg/kg·bw，按急性毒性劑量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷，屬無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。
　　2.Ames試驗(yàn)結(jié)果可以看出，在加S9與不加S9時(shí)，1，3-DG對(duì)鼠傷寒

4、沙門(mén)菌TA97、TA98、TA100、TA102四種試驗(yàn)菌株，在0.2，0.5，1.0，2.5，5.0mg/皿，5個(gè)劑量組中的回變菌落數(shù)均未超過(guò)自發(fā)回變組菌落數(shù)的兩倍以上，且無(wú)劑量反應(yīng)關(guān)系，證明在本試驗(yàn)條件下Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
　　3.小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果顯示，各劑量組的微核率與陰性對(duì)照組比較，結(jié)果無(wú)顯著差異（P＞0.05），且微核率在正常值范圍內(nèi)。陽(yáng)性對(duì)照組的微核率與各劑量組及陰性對(duì)照組比較，結(jié)果具有顯著的差異性（P＜

5、0.01）。PCE/NCE均大于0.1，屬于正常范圍之內(nèi)。說(shuō)明在本試驗(yàn)條件下，1，3-DG未使小鼠嗜多染紅細(xì)胞的微核率發(fā)生改變。
　　4.精子畸形試驗(yàn)結(jié)果顯示，1，3-DG各劑量組的精子畸形率與陰性對(duì)照組相比，結(jié)果均無(wú)顯著差異(P＞0.05），陽(yáng)性對(duì)照組精子畸形率與各劑量組及陰性對(duì)照組相比較，結(jié)果具有顯著差異(P＜0.01）。說(shuō)明在本試驗(yàn)條件下，1，3-DG在該劑量范圍內(nèi)不引起小鼠精子畸形率增高。
　　5.30天喂養(yǎng)試驗(yàn)的結(jié)

6、果也未發(fā)現(xiàn)對(duì)試驗(yàn)大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育、血液學(xué)、生化學(xué)、臟體比及組織病理學(xué)有明顯不良影響。
　　6.小腸腔內(nèi)DG組的1(3)-甘油一酯(monoglycerides，MG)的含量高于TG組，而2-MG的含量卻低于TG組，兩組間1，2(2，3)-DG的含量無(wú)明顯差異。說(shuō)明在小腸腔內(nèi)1，3-DG先酶解為1(3)-MG和自由脂肪酸(free fatty acids，F(xiàn)FA)，而TG在小腸腔內(nèi)酶解為2-MG和FFA。
　　7.在小腸上皮內(nèi)，

7、DG組的-MG含量隨時(shí)間先升高再降低，1，3-DG的含量也隨之先升高再降低，而TG組中1，3-DG和-MG含量無(wú)明顯變化，說(shuō)明1-MG進(jìn)入上皮后，在相關(guān)酶的作用下重新合成1，3-DG。TG組較1，3-DG組2-MG和1，2-DG的含量隨時(shí)間變化更加明顯，說(shuō)明在小腸上皮內(nèi)，一部分2-MG可通過(guò)合成1，2-DG，進(jìn)一步合成TG，而1(3)-MG卻很少通過(guò)此途徑合成TG。
　　結(jié)論：
　　在本試驗(yàn)條件下，急性毒性試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)

8、、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)、30天喂養(yǎng)試驗(yàn)均未對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生損害，說(shuō)明1，3-DG可作為毒理學(xué)安全的功能食品。
　　1，3-DG在小腸腔及小腸上皮細(xì)胞代謝途徑研究表明，TG在小腸腔首先分解為2-MG和FFA，隨后2-MG和FFA被吸收進(jìn)入小腸上皮細(xì)胞，在小腸上皮細(xì)胞內(nèi)2-MG和一分子FFA在相關(guān)合成酶的作用下先合成1，2(2，3)-DG，再進(jìn)一步合成TG。
　　1，3-DG在小腸腔首先被酶解為1(3)-MG和FFA