炭團菌抑菌活性成分及其對松枯梢病菌的影響.pdf

1、本文運用植物病理學(xué)、分子生物學(xué)，生物化學(xué)、有機化學(xué)等方法，對炭團菌菌絲體發(fā)酵液中抑菌活性物質(zhì)對樟子松枯梢病菌的影響、抑菌活性成分分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定、抑菌活性物質(zhì)生態(tài)安全性檢驗、抑菌活性物質(zhì)穩(wěn)定性及炭團菌與樟子松枯梢病菌分類的分子生物學(xué)驗證進行研究。
　　(1)應(yīng)用通用引物ITS1與ITS4從試驗菌株中分別擴增出目的片段617bp和544bp，GenBank登陸號分別為EU744544和EU796887。通過GenBank中BLAS

2、T，確認試驗菌株分別為Hypoxylon perforatum和Sphaeropsis sapinea。
　　(2)炭團菌菌絲體發(fā)酵液中活性物質(zhì)的提取采用水提和酯提2種方式。水提方式采用直接提取法和超聲波提取法2種方法，酯提方式選擇正丁醇、乙酸乙酯、乙醇3種萃取劑。各提取物對病原菌的抑菌活性研究選用菌絲生長抑制率和孢子萌發(fā)抑制率2個指標(biāo)，對病原菌菌絲生長的抑制測定采用生長速率法，對病原菌孢子萌發(fā)的抑制試驗采用懸滴法。結(jié)果表明炭團菌

3、菌絲體發(fā)酵液5種提取物對樟子松枯梢病菌均有一定的抑菌活性，其中乙酸乙酯提取物對病原菌菌絲生長的抑制率最高，達到73.20％;乙酸乙酯提取物、超聲波提取物、正丁醇提取物對病原菌孢子萌發(fā)抑制率均超過90％。
　　(3)采用生物活性跟蹤技術(shù)，運用柱層析、TLC等方法對發(fā)酵液提取物中的抑菌活性成分進行了分離、純化。結(jié)果表明該提取物中有3個組分，組分Ⅰ的抑菌率最高(72.94％)。綜合氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)的檢測結(jié)果，組分Ⅰ含3種化合物，其

4、中得率最高的為對甲氧基肉桂酸甲酯(57.952％)，其他兩個化合物分別為鄰苯二甲酸二異丁酯(得率13.592％)和鄰苯二甲酸二丁酯(得率28.455％)。
　　(4)炭團菌液體培養(yǎng)菌液乙酸乙酯提取物穩(wěn)定性的研究選用紫外線、溫度、pH值、氧化劑與還原劑以及貯存時間5個因子。乙酸乙酯提取物對自然環(huán)境下的紫外線、溫度具有很高的穩(wěn)定性，并且具有一定的抗氧化還原能力和良好的耐熱性，長期貯存不影響其抑菌活性。
　　(5)小鼠毒性試驗中未