青蒿琥酯對大鼠肺纖維化中Ⅳ型膠原、MMP-2-9和TIMP-1-2表達的影響及機制.pdf

1、目的：肺纖維化（pulmonary fibrosis）是一種以彌漫性肺泡炎和肺泡結構紊亂為病理特征的疾病，臨床上已有藥物如糖皮質激素聯(lián)合免疫抑制劑、氧療法等對其進行治療，但是發(fā)現(xiàn)這些治療方法對根除這類疾病無顯著功效。本實驗旨在觀察青蒿琥酯對博來霉素誘導的大鼠肺纖維化過程中Ⅳ型膠原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表達的影響，為青蒿琥酯抗肺纖維化的作用機制提供理論依據，為阻滯肺纖維化提供新的思路。
　　方法：實驗分

2、為兩部分。第一部分為探討青蒿琥酯對成纖維化大鼠肺組織Ⅳ型膠原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表達的影響及其機制。雄性SD大鼠40只，隨機分為生理鹽水對照組（NS組）、博萊霉素+生理鹽水模型組（BLM組）、博來霉素+青蒿琥酯治療組（AT組）和生理鹽水+青蒿琥酯對照組（AC組），各組大鼠隨機分為10只/組。NS組和AC組氣管內一次性給生理鹽水約0.3 ml。BLM和AT氣管內一次性給博來霉素5 mg/kg。次日NS組、B

3、LM組每日腹腔注射生理鹽水1 ml，AT組和AC組每日腹腔注射青蒿琥酯10 mg/100g。觀察大鼠的一般狀態(tài)。于28天后處死大鼠，計算肺系數，取肺組織進行HE染色，進行肺泡炎評分和肺纖維化評分，用Western blot檢測MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和Ⅳ型膠原表達情況。第二部分為探討青蒿琥酯對成纖維化大鼠肺成纖維細胞（lung fibroblast，LF）中Ⅳ型膠原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIM

4、P-2表達的影響及機制。在這一階段的試驗中，肺纖維化大鼠模型和分組與第一部分的肺纖維化模型相同，取雄性SD大鼠40只，各組大鼠隨機分為10只/組，進行LF提取，細胞培養(yǎng)至第四代行免疫組織化學染色鑒定Vimentin蛋白的表達，RT-PCR檢測MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和Ⅳ型膠原表達情況。
　　結果：⑴NS組和AC組大鼠一般狀態(tài)良好。BLM組和AT組大鼠狀態(tài)多有下降，大鼠毛發(fā)蓬松，無光澤，呼吸急促，肺部噦音明

5、顯且持續(xù)時間延長，精神萎靡，進食明顯減少，活動少，體重減輕。但AT組大鼠狀態(tài)較BLM組大鼠狀態(tài)稍有好轉。⑵NS組和AC組大鼠肺組織顏色紅潤，質地柔軟，可見少量散在出血。BLM組大鼠肺組織呈蒼白色，表面凹凸不平，質地較硬，有些大鼠可見肺大泡。AT組大鼠肺組織與BLM組相比，肉眼未見明顯差異。BLM組的肺系數明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計學意義。⑶HE染色顯示NS組和AC組大鼠肺組織結構完整，可見大量的含氣肺泡，見少量肺泡炎癥細胞沉積，肺泡

6、壁無明顯增厚。少量膠原沉著。BLM組肺泡結構明顯破壞，出現(xiàn)大范圍的肺實變。大量膠原沉積。AT組中炎性細胞浸潤較BLM組減少，可見灶狀的纖維化區(qū)域但病變程度較BLM組輕。⑷肺泡炎評分和肺纖維化評分中，BLM組明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計學意義。⑸BLM組大鼠TIMP-1、TIMP-2、Ⅳ型膠原蛋白的表達顯著高于其他三組。而MMP-2和MMP-9蛋白在BLM組的表達高于NS組和AC組，但低于AT組。差異具有統(tǒng)計學意義。⑹LF細胞呈長梭形，

7、有偽足，胞體明亮，有較長的突起，胞核呈卵圓形，位于細胞中央，呈放射狀或柵欄狀排列，12h左右貼壁，2-3d左右伸展，4-5d進入對數生長期，7-8d后生長接近融合，并彼此連接成網狀。⑺免疫組化結果可見，Vimentin蛋白表達于LF細胞質中，呈黃棕色網狀形態(tài)分布，視野內幾乎均呈陽性表達。陽性表達率為99.4％。⑻BLM組大鼠TIMP-1、TIMP-2、Ⅳ型膠原mRNA的表達顯著高于其他三組。而MMP-2和MMP-9 mRNA在BLM組的

8、表達高于NS組和AC組，但低于AT組。差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結論：①青蒿琥酯可以抑制博來霉素誘導的肺纖維化，能夠減輕大鼠肺泡炎、減少膠原的沉積和降低肺纖維化嚴重程度。②青蒿琥酯對肺纖維化大鼠肺組織中Ⅳ型膠原、TIMP-1、TIMP-2的表達有一定的下調作用，但對MM-2/9的表達呈上調趨勢。③青蒿琥酯對肺纖維化大鼠的LF中Ⅳ型膠原、TIMP-1、TIMP-2的表達有一定的下調作用，但對MM-2/9的表達呈上調趨勢。④青蒿琥酯的