腦出血誘發(fā)心肌損傷的機制研究及扶正護腦膠囊對其干預的影響.pdf

1、腦出血患者常發(fā)生繼發(fā)性的心肌損害，臨床上稱為腦心綜合征，表現(xiàn)為心電圖改變、心律失常乃至心跳停止，常加速病情惡化，影響預后。腦心綜合征的研究臨床報道很多，而實驗研究卻很少，其機制尚不清楚，亟待我們?nèi)パ芯亢吞接?。臨床上心腦血管疾病之間相互聯(lián)系和相互影響，這已為很多臨床醫(yī)生所關(guān)注。本課題研究腦出血誘發(fā)心肌損傷的機制，同時也對心腦相關(guān)的理論作初步的探討。 目的：探討腦出血誘發(fā)心肌損傷的病理生理機制，觀察扶正護腦膠囊對心肌的保護作用，并初

2、步探討心腦相關(guān)的理論。 方法：選用膠原酶加肝素聯(lián)合注射建立大鼠腦出血誘發(fā)心肌損傷模型。設(shè)假手術(shù)組、模型組、扶正護腦組和安宮牛黃組。給藥方法均為每日灌胃，實驗各組分別在造模后6h、24h、72h三個時相點取材，觀察各項指標。 ①分別采用生化方法和雙抗夾心ELISA方法檢測血清CK-MB和cTnI的含量，證明大鼠腦出血急性期存在心肌損傷，并觀察扶正護腦膠囊的抗心肌損傷作用； ②通過HE染色觀察腦血腫的形成情況，通過H

3、E染色、堿性復紅苦味酸染色、透射電鏡等觀察腦出血大鼠心肌形態(tài)學的改變以及扶正護腦膠囊的防治效應； ③采用高效液相—電化學法測定大鼠藍斑和心肌組織NE的含量，并與血清CK-MB、cTnI含量作相關(guān)性分析，探討藍斑—去甲腎上腺素系統(tǒng)(LC-NE)在腦出血誘發(fā)心肌損傷中的作用及扶正護腦膠囊的干預效果； ④采用放免方法測定大鼠心肌組織ET、TXB2、6-Keto-PGF1α的含量，采用硝酸還原酶法測定大鼠心肌組織NO含量，并與血

4、清CK-MB、cTnI含量作相關(guān)性分析，探討ET/NO、TXB2/6-Keto-PGF1α平衡紊亂在腦出血誘發(fā)心肌損傷中的作用以及扶正護腦膠囊的干預效果： ⑤采用硫代巴比妥酸法(TBA法)測定心肌組織MDA含量，采用黃嘌呤氧化酶法測定心肌組織SOD活性，并與血清CK-MB、cTnI含量作相關(guān)性分析，探討氧化應激在腦出血誘發(fā)心肌損傷中的作用以及扶正護腦膠囊的干預效果； ⑥采用免疫組織化學SABC法，測定心肌組織TNF-α、

5、IL-1β和HSP70的蛋白表達，并進行圖像分析，觀察所測指標的IOD值。并與血清CK-MB、cTnI含量作相關(guān)性分析，探討炎性反應在腦出血誘發(fā)心肌損傷中的作用以及機體內(nèi)源性的自我保護機制。 結(jié)果：1血清CK-MB和cTnI的含量測定模型組各時間點大鼠血清CK-MB和cTnI較同期假手術(shù)組顯著升高(P＜0.01)，術(shù)后24h達到高峰，CK-MB在術(shù)后72h下降顯著，cTnI在術(shù)后72h稍有下降。扶正護腦組、安宮牛黃組CK-MB和

6、cTnI含量較同期模型組顯著下降(P＜0.05,P＜0.01)。 2腦和心肌組織的病理形態(tài)學特征光鏡下可見：①心肌組織HE染色：模型組胞漿著色不均，心內(nèi)膜區(qū)域紅染有輕度嗜酸性變現(xiàn)象，細胞間質(zhì)水腫。②HBFP法染色：模型組在心內(nèi)膜區(qū)域呈現(xiàn)不同程度的嗜復紅著色，尤以心內(nèi)膜下和乳頭肌病變?yōu)橹亍７稣o腦組、安宮牛黃組上述病理改變較模型組有明顯改善。 電鏡下可見：模型組心肌細胞線粒體腫脹、數(shù)目減少、線粒體嵴模糊等缺血性損害和細胞間

7、質(zhì)水腫、肌原纖維橫紋模糊等心肌細胞受損表現(xiàn)。扶正護腦組、安宮牛黃組上述病理改變較模型組有明顯改善。 3藍斑和心肌組織NE的含量測定模型組大鼠藍斑和心肌組織NE含量較假手術(shù)組顯著增高(P＜0.01)。扶正護腦組、安宮牛黃組NE含量較模型組明顯下降(P＜0.05,P＜0.01)。 相關(guān)分析結(jié)果顯示：藍斑NE含量與CK-MB含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.560。心肌組織NE含量與cTnI含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.635

8、。 4心肌組織血管活性物質(zhì)的含量測定①ET/NO：模型組大鼠心肌組織ET含量、ET/NO比值較假手術(shù)組顯著增高(P＜0.01)。模型組大鼠心肌組織NO含量有輕度的升高，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。扶正護腦組和安宮牛黃組均能明顯降低心肌組織ET含量、ET/NO比值(P＜0.05，P＜0.01)，但對NO含量無明顯影響。相關(guān)分析結(jié)果顯示：心肌組織ET含量與cTnI含量呈正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)是0.562。NO含量及ET/NO比值與C

9、K-MB、cTnI含量相關(guān)性均不明顯。 ②TXB2/6-Keto-PGF1α：模型組大鼠心肌組織TXB2、6-Keto-PGF1α含量及T/K比值較假手術(shù)組顯著增高(P＜0.01)。扶正護腦組和安宮牛黃組均能明顯降低心肌組織TXB2含量、T/K比值(P＜0.05，P＜0.01)，但對6-Keto-PGF1α含量無明顯影響。相關(guān)分析結(jié)果顯示：心肌組織TXB2含量與CK-MB含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.560。T/K值與cTnI

10、含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.525。6-Keto-PGF1α含量與CK-MB、cTnI含量均無明顯的相關(guān)性。 5心肌組織MDA含量和SOD活力測定模型組心肌組織MDA含量較假手術(shù)組均顯著升高(P＜0.01)，心肌組織SOD活力顯著降低(P＜0.01)。扶正護腦組和安宮牛黃組均能明顯降低心肌組織MDA含量(P＜0.05，P＜0.01)，均能明顯升高心肌組織SOD活力(P＜0.05，P＜0.01)。相關(guān)分析結(jié)果顯示：心肌組織MD

11、A含量與cTnI含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.605。SOD活力與cTnI含量呈顯著負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.806。心肌組織MDA含量和SOD活力與CK-MB含量均無明顯的相關(guān)性。 6心肌組織TNF-α、IL-1β和HSP70蛋白的表達①TNF-α和IL-1β：TNF-α和IL-1β的陽性顆粒主要在心內(nèi)膜下的心肌細胞和血管內(nèi)皮細胞的胞漿中表達。IOD值分析結(jié)果顯示：模型組各時間點的IOD值較假手術(shù)組顯著升高(P＜0.01)。扶正

12、護腦組和安宮牛黃組的IOD值較模型組均明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。 ②HSP70：HSP70陽性顆粒在心內(nèi)膜下的心肌細胞和血管內(nèi)皮細胞的胞漿和細胞核中均有表達，以細胞漿中的表達較為明顯。IOD值分析結(jié)果顯示：模型組各時間點的IOD值較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.05,P＜0.01)。扶正護腦組和安宮牛黃組的IOD值較模型組均明顯升高(P＜0.05,P＜0.01)。 相關(guān)分析結(jié)果顯示：TNF-α和IL-1β的IO

13、D值與cTnI含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是0.519和0.700。HSP70的IOD值與cTnI含量呈正相關(guān)，但無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：本實驗采用膠原酶加肝素聯(lián)合注射建立大鼠腦出血誘發(fā)心肌損傷模型。該模型動物心肌損傷的特異性生化指標有明顯的改變，心肌組織也有不同程度的早期病理改變。通過實驗證實：腦出血誘發(fā)心肌損傷的機制是以LC-NE系統(tǒng)的激活為首發(fā)機制，以兒茶酚胺的分泌增多為誘因，同時繼發(fā)了氧化應激、血管活性物質(zhì)的調(diào)節(jié)失衡及炎