神經(jīng)因素對結扎大鼠冠狀動脈誘發(fā)心肌損傷的影響及機制探討.pdf

1、本研究主要通過觀察可逆性神經(jīng)阻斷劑和藥物去神經(jīng)對結扎冠狀動脈誘發(fā)心肌損傷的影響，探討神經(jīng)因素特別是感覺神經(jīng)在急性缺血性心臟病發(fā)病機制中的作用。研究主要包括以下三個方面的內(nèi)容：①、觀察結扎大鼠冠狀動脈(coronaryarteryocclusion，CAO)后心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)P物質(substanceP,SP)及mRNA表達的變化；②、觀察羅哌卡因胸段硬膜外阻滯對結扎大鼠冠狀動脈后心肌損傷的影響；③、觀察辣椒素去神經(jīng)對結扎大鼠冠狀動脈

2、后心肌電活動及心肌損傷的影響。 第一部分:結扎大鼠冠狀動脈誘發(fā)心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)P物質及mRNA表達的變化 目的:觀察結扎大鼠冠狀動脈后心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)SP及mRNA(preprotachikininmRNA，β-PPTmRNA)表達的變化，探討神經(jīng)源性機制在急性心肌缺血中的作用。 方法:健康雄性SD大鼠隨機分為假手術組和結扎冠狀動脈組，根據(jù)結扎冠狀動脈后時間點的不同，每組又分為0.5、1、3、6h四個亞組

3、。在預定時間內(nèi)取大鼠缺血區(qū)心肌組織和T1-5背根神經(jīng)節(jié)，采用免疫組化(immunohistochemistry，IHC)和酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)觀察結扎冠狀動脈后心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)SP表達的變化。采用實時定量PCR(RealtimeRT-PCR)觀察結扎冠狀動脈后0.5h心肌組織和背根神經(jīng)節(jié)β-PPTmRNA表達的變化。 結論:結扎冠狀動脈后大鼠心肌組織和背

4、根神經(jīng)節(jié)SP及β-PPTmRNA的表達明顯增加，但心肌組織β-PPTmRNA的表達顯著低于背根神經(jīng)節(jié)的表達，提示：①、SP參與了急性心肌缺血傷害性信號的中樞傳遞，心肌缺血時心肌組織內(nèi)SP表達的升高可能主要來自于感覺神經(jīng)末梢的釋放；②、心臟感覺神經(jīng)可能通過神經(jīng)肽的釋放參與心肌缺血病理過程的調節(jié)。 第二部分:羅哌卡因胸段硬膜外阻滯對結扎大鼠冠狀動脈誘發(fā)心肌損傷的影響 目的:觀察羅哌卡因胸段硬膜外阻滯(thoracicepid

5、uralanesthesia，TEA)對結扎大鼠冠狀動脈后心肌細胞凋亡、心肌組織腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactoralpha，TNF-α)含量的影響，探討神經(jīng)因素對結扎大鼠冠狀動脈誘發(fā)心肌細胞損傷的影響及其機制。 方法:健康雄性SD大鼠72只隨機分為假手術組、結扎冠狀動脈組和結扎冠狀動脈+羅哌卡因胸段硬膜外阻滯組。根據(jù)結扎冠狀動脈后時間點的不同，每組又分為3、6h兩個亞組。硬膜外干預組于結扎冠狀動脈前15mi

6、n硬膜外注射1％羅哌卡因15μl，6h組3h時追加10μl，結扎冠狀動脈組硬膜外注射等容積生理鹽水。預定時間內(nèi)采血，取缺血區(qū)心肌組織。采用比色法測心肌組織caspase-3活性和原位末端脫氧核糖核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記法(terminaldeoxynucleotiyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling，TUNEL)觀察心肌細胞凋亡情況，ELISA法測心肌組織TNF-α含量。

7、 結論:羅哌卡因硬膜外阻滯可以減輕結扎大鼠冠狀動脈誘發(fā)的心肌損傷，提示神經(jīng)因素在心肌缺血損傷過程中發(fā)揮著重要作用。 第三部分:辣椒素去神經(jīng)對結扎大鼠冠狀動脈誘發(fā)心肌電活動及心肌損傷的影響 目的:觀察辣椒素去神經(jīng)對結扎大鼠冠狀動脈后心律失常、心肌細胞凋亡、缺血區(qū)心肌組織SP含量、心功能變化的影響，探討感覺神經(jīng)對缺血后心肌電活動及心肌損傷的影響。 方法:健康雄性SD大鼠隨機分為對照和辣椒素去神經(jīng)組。辣椒素去神經(jīng)組大

8、鼠辣椒素90mg/Kg分三次皮下注射，對照組給予等容積辣椒素溶劑。三次注射完成后7天選擇甩尾反射潛伏期明顯延長的大鼠進行后續(xù)實驗。右頸動脈插管后建立心肌缺血模型，根據(jù)結扎冠狀動脈后時間點的不同，每組又分為3、6h兩個亞組。連續(xù)記錄大鼠心電圖，在預定時間內(nèi)采血、取心肌組織。檢測心肌組織caspase-3活性、心肌細胞TUNEL染色陽性率和缺血后6h心肌組織SP含量。另外，從兩組動物中各隨機抽取6只大鼠，利用Langendorf體外灌流系統(tǒng)