SOCS-1和SOCS-3在膿毒癥小鼠肝、脾中表達的研究.pdf

1、膿毒癥(sepsis)和多器官功能障礙綜合征(Multip1eOrganDysfunctionSyndrome，MODS)是當今國際醫(yī)學界共同矚目的研究熱點。目前，雖然針對其治療已取得很大進展，但其仍是危重癥患者死亡的主要原因之一，其死亡率高達50％～90％。 長期以來，我們都把膿毒癥和MODS當作過度炎癥反應，所以除了原發(fā)病的治療外，抗炎治療己成為處理膿毒癥和MODS的基本策略。大量證據(jù)表明，傳統(tǒng)抗炎藥物如皮質類固醇、非甾類抗

2、炎藥在拮抗機體過度炎癥反應方面，雖療效切確切，但因其作用廣泛，故對機體有一定毒副作用。近10多年來，應用拮抗炎癥介質(抗TNF、抗IL-1等)來治療MODS作了大量的研究工作，盡管在動物模型上已取得令人鼓舞的結果，但在臨床上單純用一種或幾種炎癥介質的拮抗劑或抗體治療MODS并未取得滿意效果。這使我們認為，由多種致病因素導致機體出現(xiàn)的全身炎癥反應綜合征(SystemicInflammatoryResponseSyndrome，SIRS)和

3、代償性抗炎反應綜合征(compensatoryanti-inflammatoryresponsesyndrome，CARS)之間的平衡被打破甚至失控是MODS重要的病理學基礎和形成的根本原因。這種過度失控的全身性炎癥反應造成宿主自身組織結構和生理功能的廣泛損害，最終引起MODS，乃至死亡。我們把這種沖突看作是免疫紊亂的表現(xiàn)，希望通過研究免疫系統(tǒng)的變化，找出治療膿毒癥的方法，肝臟和脾臟作為重要的免疫器官是我們的首選對象。 作為調控

4、炎癥反應的關鍵環(huán)節(jié)，細胞信號傳導系統(tǒng)以其數(shù)量少但作用廣泛的特點吸引了人們的注意，細胞因子信號抑制因子(SOCS)就是其中的一員。SOCS家族蛋白，是一類可被多種細胞因子誘導產生，反過來又可以負反饋方式對信號傳導途徑進行抑制調節(jié)的蛋白分子。SOCS家族由SOCS1～SOCS7和CIS八種成員組成，其結構相似。SOCS家族成員的蛋白質結構含多變的N區(qū)、位于中間的SH2區(qū)和保守的SOCS盒(SOCSbox)三個部分。SH2區(qū)含有SH2結構域，

5、它能與其他信號蛋白的磷酸化酪氨酸殘基結合，通過該區(qū)域，不同的SOCS蛋白識別不同的目標，進而調節(jié)多種細胞因子信號傳導途徑。正常情況下細胞內SOCS表達水平極低，但多種細胞因子、生長因子和激素可誘導SOCS迅速合成，產生的SOCS反過來又主要通過對JAK-STAT信號通路的調節(jié)抑制細胞因子及激素的信號轉導，形成一個負反饋調節(jié)通路，影響炎性介質，甚至影響凋亡的發(fā)生。為了探討SOCS的生理作用，有許多相關研究被開展，包括細胞培養(yǎng)模式，基因工程

6、小鼠、各種損傷動物模型。這些體內及機外實驗證明SOCS-1和SOCS-3是這個家族中僅有的對免疫系統(tǒng)有作用的成員，我們認為它與MODS膿毒癥的發(fā)生發(fā)展也可能有密切關系?？紤]到SOCS的自穩(wěn)作用，若能抑制肝臟和脾臟中炎癥因子的失控，則對膿毒癥休克及MODS病人的治療將有所突破。 目前在MODS研究中，SOCS在膿毒癥中作用的報道甚少，我們擬用盲腸結扎并穿刺術(CLP)致MODS為研究模型，采用分子生物學等技術，通過觀察SOCS1和

7、SOCS3在小鼠肝臟和脾臟中的變化，明確SOCS1和SOCS3與膿毒癥的關系及意義，弄清SOCS在體內的可能的作用機制，從而為MODS的治療提供新的策略。 目的：通過建立膿毒癥的動物模型，觀察膿毒癥小鼠在疾病發(fā)展過程中SOCS1和SOCS3在肝臟和脾臟中的基因水平和蛋白水平的表達的變化，并明確其表達的部位，弄清SOCS在體內的可能的作用機制從而為MODS的治療提供新的策略。 方法：健康成年雄性BALB/c小鼠62只，體重

8、22-27g，隨機分為7組，正常對照組6只，假手術組6只，術后2、6、12、24、48小時處死組各6只，采用盲腸結扎并穿刺術制作膿毒血癥模型。取肝臟和脾臟組織行病理檢查和提取RNA及蛋白質，采用RT-PCR測定組織中SOCS1和SOCS3的mRNA的相對含量，用免疫印跡方法測定組織中SOCS1和SOCS3的相對蛋白含量，用SPSS統(tǒng)計軟件測定之間的變化關系。用免疫組化法觀察SOCS1和SOCS3在組織中表達的位置。剩余20只手術后觀察生

9、存時間直至死亡，記錄72小時生存率。 結果：膿毒癥手術后SOCS3在肝臟內基因表達和蛋白表達量有升高趨勢，但與對照組區(qū)別不大；SOCS3在脾臟內的基因表達和蛋白表達在2小時迅速升高，至12小時到頂峰；SOCS1在肝臟內的基因表達在第6小時迅速升高，至24小時到頂峰，蛋白表達在第6小時迅速升高，并一直保持高位；SOCS1在脾臟中僅檢測到基因表達，也是隨時間逐漸上升，并一直保持高位；統(tǒng)計分析示肝和脾中SOCS1和SOCS3之間彼此呈