墨汁鬼傘液體發(fā)酵培養(yǎng)條件及生物活性研究.pdf

1、墨汁鬼傘(Coprinusatramentarius)又名柳樹蘑，柳樹鉆，是鬼傘屬中最有代表性的一種，在真菌界被認(rèn)定為一種不可食用品種，但其同時具有多種醫(yī)學(xué)保健功能。當(dāng)前關(guān)于墨汁鬼傘的研究報道主要是固體栽培及生物學(xué)特性研究，未見關(guān)于墨汁鬼傘液體發(fā)酵培養(yǎng)的報道，也沒有針對其生物活性物質(zhì)的深入研究。 本文對墨汁鬼傘進(jìn)行液體發(fā)酵深層培養(yǎng)，對影響液體發(fā)酵的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行全面研究，確定其初步培養(yǎng)條件，然后以菌體生長和胞外多糖為指標(biāo)對

2、培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。通過全因子中心組合實驗設(shè)計對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化表明：當(dāng)葡萄糖、玉米粉、麩皮、KH2PO4和MgSO4·7H2O分別為13.51、17.07、7.62、2.29和2.00g/L時，胞外多糖最大預(yù)測值為293.73mg/L；當(dāng)上述變量為10.07、18.02、11.63、1.58和4.00g/L時，菌絲體最大生長量為6.24g/L。通過Box—Behnken實驗設(shè)計對發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到當(dāng)溫度、轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)時間

3、、裝液量分別為28.4℃、134.5r/min、119.28h、180.5mL/500mL時，胞外多糖最大預(yù)測值為415.58mg/L；當(dāng)上述變量為20.45℃、129r/min、75.12h、194.5mL/500mL時，菌絲體最大生長量為7.26g/L。 對墨汁鬼傘發(fā)酵液進(jìn)行初步分離，得到六個粗組分，為胞內(nèi)外粗蛋白、粗多糖，及胞內(nèi)外去除蛋白和多糖的小分子組分。 體外試驗表明，胞外蛋白和胞外多糖的抗氧化活性最強(qiáng)，非酶糖

4、基化反應(yīng)抑制率最高。劑量0.1mg/mL時，胞外蛋白羥自由基清除率為73.57％(同濃度Vc為66.74％)，超氧自由基清除率為79.36％(同濃度Vc為65.74％)；胞外多糖羥自由基清除率為59.10％，超氧自由基清除率為52.15％。劑量0.1mg/mL時，胞外蛋白和多糖非酶糖基化反應(yīng)抑制率分別為65.70％、42.36％?；钚则炞C試驗表明，墨汁鬼傘胞外多糖和胞外蛋白具有良好的抗氧化活性和降血糖功效。 為更好地發(fā)揮墨汁鬼傘

5、液體發(fā)酵成分的活性功能，需對活性粗組分進(jìn)行分離純化，精制成高純度的具有生物活性的制劑。本文對胞外蛋白和胞外多糖進(jìn)行了初步分離純化。采用AKTAexplorer100及與其相配套的標(biāo)準(zhǔn)DEAE—纖維素柱和標(biāo)準(zhǔn)凝膠柱對墨汁鬼傘胞外多糖進(jìn)行了初步分離純化。采用TOYOPEARLCM—650M、TOYOPEARLSP—650M離子交換柱對墨汁鬼傘胞外蛋白進(jìn)行分離，檢測各個組分的體外抗氧化活性，通過SDS-PAGE對活性組分的分子量進(jìn)行初步探明。