TLR-2、4在AS患者PBMC中的表達(dá)及阿托伐他汀對(duì)其表達(dá)的干預(yù)研究.pdf

1、背景強(qiáng)直性脊柱炎(AnkylosingSpondylitis，AS)是一種慢性的炎癥性疾病，其病因目前尚未完全清楚，研究證明可能與遺傳及感染有關(guān)。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)天然免疫在AS的發(fā)病和病情進(jìn)展中起到了一定的作用。TollLikeReceptors(TLRs)是一組介導(dǎo)天然免疫的受體分子，其中TLR-2、TLR-4不僅介導(dǎo)廣泛的病原分子模式的識(shí)別，還能介導(dǎo)對(duì)熱休克蛋白、透明質(zhì)酸片斷、纖粘連蛋白等多種內(nèi)源性抗原的識(shí)別，是連接天然免疫和獲得

2、性免疫的關(guān)鍵分子。AS是一種發(fā)病率(我國(guó)為0.3％左右)和致殘率高的常見病，但是AS的治療至今缺乏有效的理想改善病情抗風(fēng)濕藥物(diseasemodifyingantirheumaticdrugs，DMARDs)他汀類藥物由于其在抗高血脂領(lǐng)域內(nèi)的有效性，而得到廣泛使用。近年的研究還發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物在抗高血脂之外具有抗免疫效用。 目的:觀察天然免疫分子TLR-2、TLR-4在外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的mRNA水平表達(dá)，研究其變

3、化在AS發(fā)病機(jī)制和病情進(jìn)展的作用。探討HMA-CoA還原酶抑制劑阿托伐他汀對(duì)AS患者TLR-2、TLR-4表達(dá)的影響，為他汀類藥物是否能作為治療AS的藥物提供理論依據(jù)。 方法:第一部分：1.研究對(duì)象包括AS活動(dòng)期患者30例和健康志愿者30例。患者組包括27例男性，3例女性，平均年齡30.1歲；對(duì)照組包括24例男性，6例女性，平均年齡22.4歲。 2.所有入組患者做---(BASDAI)及----(BASFI)評(píng)估。

4、 3.所有入組AS患者做ESR及CRP的血清學(xué)檢測(cè)。 4.抽取被研究者外周靜脈血分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。 5.提取細(xì)胞mRNA。采用RT-PCR方法技術(shù)，觀察AS患者和正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞中TLR-2、TLR-4的mRNA表達(dá)率。 6.提取外周血單個(gè)核細(xì)胞總蛋白。采用WesternBlot技術(shù)，觀察AS活動(dòng)期患者和正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞中TLR-2、TLR-4的蛋白表達(dá)率。 7.AS組與健康志愿者對(duì)

5、照組均數(shù)差異性檢驗(yàn)采用T檢驗(yàn)；TLRs與患者BASDAI及BASFI的相關(guān)性分析采用相關(guān)分析。 第二部分：1.納入AS活動(dòng)期患者12例。 2.入組被研究者作BASDAI及BASFI評(píng)估。 3.入組AS患者做ESR及CRP的血清學(xué)檢測(cè)。 4.抽取被研究者外周靜脈血分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。 5.每例患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分為阿托伐他汀干預(yù)組(0.01mMol/L)和不干預(yù)對(duì)照組；體外培養(yǎng)外周血單個(gè)核細(xì)胞2

6、4小時(shí)。 6.收獲細(xì)胞提取mRNA。采用RT-PCR方法技術(shù)，觀察阿托伐他汀干預(yù)組和不干預(yù)對(duì)照組細(xì)胞中TLR-2、TLR-4的mRNA表達(dá)率。 7.阿托伐他汀干預(yù)組和空白對(duì)照組均數(shù)差異性檢驗(yàn)采用配伍組設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)。 結(jié)果:第一部分：1.患者BASDAI評(píng)分與ESR結(jié)果具有相關(guān)性(r=0.534，p＜0.05)，BASDAI評(píng)分與CRP結(jié)果具有相關(guān)性(r=0.398，P＜0.05)。 2.同時(shí)患者BASFI

7、評(píng)分與ESR結(jié)果也具有相關(guān)性(r=0.507，P＜0.05)，BASFI評(píng)分與CRP結(jié)果也具有相關(guān)性(r=0.54，P＜0.05)。 3.AS患者TLR-2mRNA(1.59±1.43)的表達(dá)較健康志愿者對(duì)照組(0.06±0.039)高，p＜0.05。4.AS患者TLR-4mRNA(0.60±0.73)的表達(dá)較健康志愿者對(duì)照組(0.06±0.039)高，p＜0.05。 5.AS患者TLR-4蛋白(12.0±8.6，p＜0

8、.05)的表達(dá)較健康志愿者對(duì)照組(4.48±2.1)高。 6.患者BASDAI評(píng)分與患者TLR-4mRNA的表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.347，p＜0.05)，患者BASDAI評(píng)分與患者TLR-2mRNA的表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.759，p＜0.05)。 7.患者BASFI評(píng)分與患者TLR-2mRNA的表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.664，p＜0.05)。 第二部分：1.阿托伐他汀干預(yù)組TLR-2的mRNA表達(dá)率低于不干預(yù)

9、對(duì)照組(p＜0.05)。 2.阿托伐他汀干預(yù)組TLR-4的mRNA表達(dá)率低于不干預(yù)對(duì)照組(p＜0.05)。 結(jié)論:1.AS患者PBMC的TLR-2、TLR-4的表達(dá)均較健康志愿者高，提示TLR-2、TLR-4可能參與了AS的發(fā)病。 2.AS患者PBMC的TLR-2、TLR-4表達(dá)與BASDAI及BASFI具有相關(guān)性，可見，TLR-2和TLR-4的表達(dá)異常與AS的病情活動(dòng)和進(jìn)展相關(guān)，值得進(jìn)一步研究。 3.阿