鉗蝎鎮(zhèn)痛活性肽(AS)表達產物的體外變復性.pdf

1、通過外源基因在E.coli中的表達來獲得蛋白質類藥物,已經成為生產基因工程藥物的重要手段,如何對包涵體蛋白進行高濃度、高收率的復性,是重組蛋白質生產的關鍵性技術之一。本文對鉗蝎鎮(zhèn)痛活性肽(AS)包涵體的重折疊復性進行了研究,以有助于這一問題的解決。
　　 首先,將鉗蝎鎮(zhèn)痛活性肽(AS)的基因克隆到質粒pET28a上,構建表達質粒pET28a-AS,進行IPTG誘導表達,SDS-PAGE電泳分析其可溶性,結果表明大部分以包涵體的形

2、式存在,表達量約占菌體總蛋白的31％:將鉗蝎鎮(zhèn)痛活性肽(AS)的基因克隆到質粒pET28a上,構建表達質粒pET28a-His-AS,進行IPTG誘導表達,SDS-PAGE電泳分析其可溶性,結果表明大部分以包涵體的形式存在,表達量約占菌體總蛋白的35％。
　　 將含有表達質粒pET28a-AS和表達質粒pET28a-His-AS的菌體蛋白進行超聲波破碎,離心后得到包涵體沉淀。分別用Triton X-100和1M的鹽酸胍分別洗滌包

3、涵體,包涵體蛋白經8M鹽酸胍變性后,采用分步稀釋法使變性蛋白的終濃度為0.1mg/ml,復性后得到的蛋白收率分別為22.6％和23.2％。
　　 將復性后得到的蛋白進行柱層析分離純化。含表達質粒pET28a-AS的包涵體蛋白復性后經SP Sepharose Fast Flow層析柱后,SDS-PAGE電泳分析,得到純度很高的蛋白,Bradford法測蛋白濃度,收率為1.6mg/L發(fā)酵液；含表達質粒pET28a-His-AS的包涵