玻璃體切除術(shù)后晶狀體上皮細(xì)胞的變化及茶多酚眼用凝膠干預(yù)作用的實驗研究.pdf

1、目的:觀察玻璃體切除術(shù)后微環(huán)境的改變對兔晶狀體上皮細(xì)胞線粒體活性氧、膜電位、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及Caspases-3表達(dá)的影響及茶多酚眼用凝膠干預(yù)后的變化,研究玻璃體腔微環(huán)境的改變對兔晶狀體上皮細(xì)胞的影響及茶多酚眼用凝膠的干預(yù)作用,闡明玻璃體切除術(shù)后并發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制及茶多酚眼用凝膠的效果。方法:1.體外培養(yǎng)兔晶狀體上皮細(xì)胞(Rabbit lens epithelial cells,RLECs),分別采用BSS、硅油、O2、C3F8制成特殊用途

2、選擇培養(yǎng)基,模擬體內(nèi)玻璃體切除術(shù)后條件,加入不同濃度的茶多酚眼用凝膠進(jìn)行干預(yù),觀察玻璃體腔微環(huán)境的改變對兔晶狀體上皮細(xì)胞形態(tài)的變化。2.配制含終濃度分別為1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0μg/ml茶多酚眼用凝膠的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)兔晶狀體上皮細(xì)胞,通過CCK-8法篩選出適合細(xì)胞生長的茶多酚眼用凝膠的安全濃度。3.實驗分為四組:A組(正常RLECs)-正常組,B組(RLECs+BSS、硅油、O2、C3F8

3、)-對照組,C組(RLECs+BSS、硅油、O2、C3F8+10μg/ml茶多酚眼用凝膠),D組(RLECs+BSS、硅油、O2、C3F8+100μg/ml茶多酚眼用凝膠)。4.通過流式細(xì)胞儀檢測線粒體活性氧、膜電位的情況,免疫熒光化學(xué)檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的表達(dá)情況及免疫組化檢測凋亡相關(guān)蛋白Caspases-3蛋白表達(dá)變化,進(jìn)而研究玻璃體切除術(shù)后并發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制及茶多酚眼用凝膠的效果。結(jié)果:1.倒置相差顯微鏡下見:體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞

4、呈梭形或多邊形,單層貼壁生長,細(xì)胞邊界清楚。2. CCK-8法檢測顯示:(1)加入終濃度為1000μg/ml的茶多酚眼用凝膠組OD值明顯低于單純晶狀體上皮細(xì)胞組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);(2)加入終濃度分別為100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml的茶多酚眼用凝膠組與單純晶狀體上皮細(xì)胞組OD值未見明顯差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。3.在BSS、硅油、O2、C3F8損傷模型建立后,倒置相差顯微鏡下觀察AD組細(xì)胞見:A

5、組細(xì)胞呈梭形或多邊形,單層貼壁生長,細(xì)胞邊界清楚。B組一些細(xì)胞體積縮小、變圓,折光性改變,細(xì)胞周圍見透亮圈;細(xì)胞核縮小,分裂為多個或出現(xiàn)核邊聚;培養(yǎng)液中出現(xiàn)圓形懸浮細(xì)胞及細(xì)胞碎片。CD組細(xì)胞呈梭形或多邊形,單層貼壁生長,細(xì)胞邊界清楚,少許細(xì)胞體積縮小、變圓,折光性改變,培養(yǎng)液中未出現(xiàn)圓形懸浮細(xì)胞及細(xì)胞碎片。4.在BSS、硅油、O2、C3F8培養(yǎng)條件下的上皮細(xì)胞線粒體活性氧產(chǎn)生增多,而應(yīng)用茶多酚眼用凝膠干預(yù)組活性氧的產(chǎn)生明顯減少。5.在B

6、SS、硅油、O2、C3F8培養(yǎng)條件下的上皮細(xì)胞線粒體膜電位降低;而茶多酚眼用凝膠干預(yù)組細(xì)胞線粒體膜電位升高。6.經(jīng)免疫熒光檢測,在BSS、硅油、O2、C3F8培養(yǎng)條件下晶狀體上皮細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的陽性率明顯降低,而應(yīng)用茶多酚眼用凝膠干預(yù)后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的陽性率明顯升高。7.經(jīng)免疫組化檢測,在BSS、硅油、O2、C3F8培養(yǎng)條件下晶狀體上皮細(xì)胞中Caspases-3表達(dá)明顯,而應(yīng)用茶多酚眼用凝膠干預(yù)后Caspases-3表達(dá)明顯降低。結(jié)論:玻璃體切除