柑橘采后病害拮抗菌檸檬形克勒克酵母34-9誘變改良研究.pdf

1、菌株34-9(Kloeckeraapiculata)是本實(shí)驗(yàn)室從柑橘園根際土壤中分離獲得的1株生防酵母菌，該菌對(duì)柑橘青、綠霉病菌具有較強(qiáng)的拮抗作用，但在后續(xù)研究中發(fā)現(xiàn)該菌株存在不易干燥、抑菌譜窄等問(wèn)題，其抑菌活性還有待提高。因此，為開(kāi)發(fā)出能代替化學(xué)藥劑的安全無(wú)毒生防制劑奠定基礎(chǔ)，并為下一步運(yùn)用基因工程對(duì)拮抗酵母菌進(jìn)行遺傳改造提供試驗(yàn)材料，有必要對(duì)其進(jìn)行誘變改良，以期獲得能夠防治柑橘采后病害的多功能酵母菌。 本研究以34-9為出發(fā)

2、菌株，通過(guò)紫外線(UV)、UV+LiCl、微波輻射、60Coγ射線等誘變處理，分析了各種誘變因子對(duì)34-9的誘變效應(yīng)，明確了各誘變因子的最佳誘變劑量和最佳誘變時(shí)間，用離體和活體篩選相結(jié)合的方法從隨機(jī)挑選的突變株中篩選出4株高效突變菌株。同時(shí)對(duì)誘變菌株γ-60-11在離體條件下的生長(zhǎng)特性、抑菌譜及培養(yǎng)條件進(jìn)行了初步研究。 主要研究結(jié)果如下： 1.采用UV、UV+IACl對(duì)34-9進(jìn)行誘變改良，處理的最佳劑量為UV處理15w

3、30cm照射20s，UV+LiCl處理UV照射20s并在平板中加入LiCl0.3％(w/v)，選育到1株生理特性有明顯改善的變異菌株UV20-13，果實(shí)試驗(yàn)中，7d后柑橘青、綠霉病的發(fā)病率分別比出發(fā)菌株降低25.56％和10.00％；采用微波輻照，輻照的最佳時(shí)間為50s，選育到1株在活體試驗(yàn)7d后，柑橘青霉病的發(fā)病率比出發(fā)菌株降低10.43％的拮抗菌株W50-56，選育到1株在果實(shí)試驗(yàn)7d后，柑橘綠霉病的發(fā)病率比出發(fā)菌株降低10.62％

4、的拮抗菌株W50-47；采用60Coγ射線處理，輻射的最佳劑量為600Gy，選育到1株生理特性有明顯改善的變異菌株γ-60-11，果實(shí)試驗(yàn)中，7d后柑橘青、綠霉病的發(fā)病率分別比出發(fā)菌株降低12.82％和12.46％。所選育的菌株經(jīng)多次傳代，遺傳性狀十分穩(wěn)定。 2.對(duì)γ-60-11生長(zhǎng)特性的研究發(fā)現(xiàn)，γ-60-11與34-9相比細(xì)胞個(gè)體變小，細(xì)胞形態(tài)大部分變?yōu)闄E圓形或卵圓形，少部分仍為檸檬形；在豆芽汁培養(yǎng)基上γ-60-11菌落都很

5、小，而34-9的菌落都較大；生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)比較發(fā)現(xiàn)γ-60-11與34-9生長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致，但γ-60-11在各個(gè)時(shí)期的生物量都低于34-9。 3.研究了γ-60-11的抑菌譜：本研究從真菌中選擇了11種常見(jiàn)的果樹(shù)病原真菌作為靶標(biāo)菌，以測(cè)定誘變所得菌株的抑菌譜。從作用效果來(lái)看，γ-60-11的抑菌譜比出發(fā)菌株34-9變寬，γ-60-11能對(duì)34-9沒(méi)有嗜殺作用的柑橘酸腐病、芒果蒂腐病、葡萄灰霉病、葡萄根霉病有一定的拮抗作用，對(duì)其他7種