復(fù)合誘變及化學(xué)融合法構(gòu)建酒精高產(chǎn)菌株.pdf

1、本試驗以紅薯為原料通過微生物發(fā)酵法生產(chǎn)酒精，與傳統(tǒng)發(fā)酵工藝不同，本試驗從天然的糖化酵母和釀酒酵母出發(fā)，以多重誘變和融合的方法選育出一株能一步發(fā)酵薯類淀粉的菌株。本文的研究主要從以下四個方面進(jìn)行： (1)對糖化酵母進(jìn)行紫外-LiCl復(fù)合誘變，確定其紫外照射時間為90s，LiCl用量為0.5％，正突變率達(dá)到21.8％。成功選育出一株遺傳性能穩(wěn)定的高產(chǎn)糖化酶菌株Au90-8，其產(chǎn)生糖化酶活力為324U/g，較出發(fā)菌株提高了48.6％。

2、 (2)對K氏釀酒酵母進(jìn)行紫外-硫酸二乙酯復(fù)合誘變，通過正交實驗確定其最佳誘變參數(shù)為紫外照射80s；DES濃度為5％，于35℃水浴振蕩處理60min。最終選出一株酒精高產(chǎn)菌株KIJ80-6，其發(fā)酵最終酒精含量為14.6％(V/V)，較出發(fā)菌株提高了39.1％ (3)將所選育出的糖化酵母高產(chǎn)菌株ALJ90-8和釀酒酵母高產(chǎn)菌株Ku80-6通過化學(xué)促融劑融合。確定了KLJ80-6用0.1％的B一巰基乙醇預(yù)處理10min，在3

3、0℃時，用濃度為2％蝸牛酶酶解1.0h，其原生質(zhì)體的形成率與再生率分別為81.2％和17.4％。糖化酵母在35℃時，用濃度為2％蝸牛酶酶解1.5h，其原生質(zhì)體的形成率與再生率分別為78.2％和12.5％。對親本ALJ90-8原生質(zhì)體進(jìn)行滅活，確定其紫外滅活時間為120s。融合條件為：25℃高滲環(huán)境下用35％PEG(6000MW)處理15min，最終成功篩選出一株性能穩(wěn)定且高產(chǎn)酒精的融合子，命名為KA-6。 (4)對融合子各項指標(biāo)

4、進(jìn)行測定并對其發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定其最適生長溫度為30℃、最適生長pH為6.0、對數(shù)生長期為10h～16h，其酒精耐受度為15％(v/v)。融合子AK-2生料發(fā)酵產(chǎn)酒精最佳工藝條件為：原料粉碎過80目篩，初始接種量15％，料液比為1:4，發(fā)酵溫度為32℃，pH值4.0，發(fā)酵周期為96h。且在該優(yōu)化條件下融合子利用生料發(fā)酵，發(fā)酵液殘?zhí)呛繛?.06％，產(chǎn)酒精量為7.4％(v/v)，淀粉出酒率為54.6％。 對融合子進(jìn)行傳代性試驗