紫外誘變及電融合法構建赤蘚糖醇高產菌株的研究.pdf

1、赤蘚糖醇(Erythrito1)是一種天然存在的四碳糖醇，化學名1，2，3，4-丁四醇，分子式C4H1004，分子量122.12，，熔點126℃，沸點329～331℃，外觀為白色粉狀結晶，粉碎性好，溶于水會吸收較多能量，溶解熱為-97.4J/g，使用時有一種涼爽的口感特征。 赤蘚糖醇，在自然界中的分布十分廣泛，海藻、磨菇類以及甜瓜、葡萄、桃等水果中均含有赤蘚糖醇，由于細菌、真菌和酵母也能產生赤蘚糖醇，所以赤蘚糖醇也存在于果酒、啤

2、酒、醬油等發(fā)酵食品中。赤蘚糖醇是一種適度的甜味增量劑，甜度為蔗糖的60％～70％，不被突變鏈球菌利用，抗齲齒，不參加糖代謝和血糖變化，適宜糖尿病、肥胖病和心腦血管病人食用。具有酷似蔗糖的口味而發(fā)熱量卻接近零，生理耐受量高，可作為低熱量功能性保健食品配料，應用前景十分廣泛。 本研究旨在運用紫外誘變方法從實驗室篩選到赤蘚糖醇產生菌中選育優(yōu)良菌株，進而采用原生質體電融合技術將同種不同株的較高產赤蘚糖醇的高滲假絲酵母菌株進行融合，得到赤

3、蘚糖醇高產工程菌，并對該菌株的生長條件進行深入研究。 在菌種活化采集和篩選的同時，對赤蘚糖醇的檢測方法進行了比較，摸索出了一種利用特殊顯色劑的薄層層析檢測方法，即通過標準樣品的梯度定量點樣，制作出一張標準薄層板，在實驗中樣品只需將薄層板層析結果與標準板對照，就可以對樣品中的赤蘚糖醇進行初步定性、定量分析。這樣極大方便了在誘變菌株中高產赤蘚糖醇菌株的檢出及細胞融合實驗時在大量的融合菌株中目的融合子的檢出。 對紫外誘變高產赤

4、蘚糖醇菌進行了正交實驗，確定紫外誘變何光復活交替進行的誘變育種條件；將原生質體電融合獲得的高產菌株從溫度、培養(yǎng)時間和pH等生長條件進行了研究，最后確立高產赤蘚糖醇菌株RH-UV-L4-F9培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時間6d，初始培養(yǎng)基pH為5～6，葡萄糖濃度為30％，氮源為0.5％酵母膏與0.1％脲。經上述條件培養(yǎng)后發(fā)酵液中赤蘚糖醇含量為120.6mg/ml，比出發(fā)菌株提高了3.61倍。 對在實驗過程中影響原生質體形成率、再