

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、創(chuàng)新與借鑒中國釀造2012鼉蓁翌囂9期139——————————————————————————————————————————————————————————一。氮離子注入赤蘚糖醇生產(chǎn)菌誘變篩選高產(chǎn)菌株孟小琴1,胡永紅k,楊文革,沈飛:,李棟蕓z,于輝:,馮旌z(1南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院,江蘇南京210009;2南京新百藥業(yè)有限公司,江蘇南京210038)摘要:為了獲得赤蘚糖醇高產(chǎn)菌株,以釀酒酵母N,wGYH30566為研究對
2、象,利JEjN注入進行誘變。注入N的能量為15keV,劑量為20x1014cm240x1014Cm260x1014cm280x10“cm2、100x1014cm。、120x101cm。。結(jié)果表明最佳注入劑量為801014cm。,選育出一株赤蘚糖醇高產(chǎn)菌株H32,赤蘚糖醇產(chǎn)量提高1752%,且副產(chǎn)物甘油降低269%,經(jīng)連續(xù)10代遺傳穩(wěn)定性試驗考察,其高產(chǎn)性能穩(wěn)定,極大提高了生產(chǎn)效率。關(guān)鍵詞:氮離子注入;誘變;赤蘚糖醇:釀酒酵母中圖分類號:
3、Q93997文獻標(biāo)識碼:A文章編號:0254—5071(2012)09—0139—03ScreeningofthehighyielderythritolproducingstraillbyimplantationwithNionMENGXiaoqinl,HUYonghong,YANGWengel,SHENFei2,LIDongyun2,YUHui2,F(xiàn)ENGJinga(|CollegeofBiotechnologyandPharmace
4、uticalEngineeringNanjingUniversRyofTechnologyNanjin9210009China;2NanjingXinbaiPharmaceuticalCo,LtdNanjin9210038Ch洫a)Abstract:NionimplantationwasusedtomutateSaccharomycescerevisiaeNJWGYH30566forobtaininghigtle卜yielderythr
5、itolstrainTheoriginalstrainwasmutatedby15keVNionimplantationwiththedoseof20x1014cm。,40x1014cm~,60x1014cm。,80x1014cm‘,100x1014cm。,and120x1014cm~,respectivelyResultsshowedthattheoptimalNiondosewas80x1014cm。,andastrainofhig
6、hyielderythritolwasobtainedandnamedasH32Erythritolyieldofthemutantwasincreasedby1752%andbyproductglycerolwasdecreasedby269%comparedtothoseoftheoriginalstrainSubcultureresultsshowedthatthemutantstrainshadhi【曲geneticstabil
7、ityKeywords:Nimplantation;mutation;erythritol;Saccharomycescerevisiae赤蘚糖醇是一種高附加值的多元醇類甜味劑,廣泛存在于真菌類、水果及發(fā)酵食品中,同時也存在于人和動物的組織及體液中[12]。赤蘚糖醇具有安全性高、熱量低、口感佳等特點,并且在人體中不參與糖代謝和血糖變化,在結(jié)腸中不發(fā)酵,因此特別適用于糖尿病和肥胖患者。近幾年來,隨著經(jīng)濟的發(fā)展和生物技術(shù)的不斷改善,功能性甜
8、味劑赤蘚糖醇已成為國內(nèi)外競相開發(fā)的焦點,目前赤蘚糖醇主要應(yīng)用于食品加工業(yè)和醫(yī)藥保健業(yè)同。離子束注入技術(shù)是一種新型的生物誘變技術(shù),可用于遺傳育種和基因工程等領(lǐng)域【4】。N是目前常注入細胞的活性離子之一,N注入細胞后將與周圍的移位原子、本底原子發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生新的分子或基團而沉積下來,將直接導(dǎo)致DNA的損傷和突變,從而對生物體產(chǎn)生明顯的誘變優(yōu)勢[51。目前微生物發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)赤蘚糖醇能力低,副產(chǎn)物甘油含量高,需要對生產(chǎn)菌進行改良。傳統(tǒng)誘變方
9、法是不定向、低頻性的,導(dǎo)致篩茵的工作量較大,直接影響誘變育種效率。本實驗室利用N注入技術(shù),對從糖廠廢液中分離到的釀酒酵母NJWGYH30566進行改良,以提高赤蘚糖醇的產(chǎn)量,降低副產(chǎn)物甘油含量。同時對特異突變株的生物學(xué)特性進行詳盡研究,為其進一步工業(yè)化應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1材料與方法11菌種釀酒酵母NJWGYH30566,本實驗室保藏。12培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基(g/L):馬鈴薯200,葡萄糖20,瓊脂16,pH值自然。種子培養(yǎng)基(e/L):葡萄
10、糖150,酵母膏10,玉米漿3,pH值自然。發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖200,酵母膏20,玉米漿10,MgS047H2003。MnCl24H200005,CuS04‘5H200005,ZnS047H200008,pH值為72~74。以上培養(yǎng)基于101x105Pa高壓下,121%蒸氣滅菌20min。1。3氮離子注入131樣品制備取在PDA培養(yǎng)基上活化后的菌種,挑取1~2環(huán)接入20mU250mL的種子培養(yǎng)基中,29%下恒溫培養(yǎng)26h29h
11、至對數(shù)期。取011IlL液體菌種均勻涂布于無菌培養(yǎng)皿上,無菌風(fēng)吹干后進行N牲入誘變。132注入方式N駐入機為LZD900多功能離子注入機。實驗采用15keV的注入能量,注入劑量為0(對照)、20x1014cm240x1014cm2、60)(1014cm2、801014cm2、lOOxl014cm2、120x1014cm五,靶室真收稿日期:2012—06—28基金項目:國家自然科學(xué)基金G1171644);江蘇省產(chǎn)學(xué)研前瞻性聯(lián)合研究項目(S
12、BY201120075);江蘇省科技廳科技支撐計劃農(nóng)業(yè)部分mE2011354)作者簡介:孟小琴(1988一),女,碩士研究生,研究方向為生物分離與發(fā)酵:胡永紅,教授,博導(dǎo),通訊作者。萬方數(shù)據(jù)創(chuàng)新與借鑒中國釀造2012蓋莖碧繁9期141——————————————————————————————————————————————一一為了確保獲得的菌株具有優(yōu)良的遺傳穩(wěn)定性,分別對菌株H一2、H一32和H49做遺傳穩(wěn)定性考察。經(jīng)傳代后,有些菌株
13、生產(chǎn)赤蘚糖醇的含量明顯下降,其中編號為H32菌株的遺傳穩(wěn)定性較好,結(jié)果如表2所示。表2高產(chǎn)突變株H82遺傳穩(wěn)定性實驗Table2The驢n酣cstabH時ofhighyioldmutantstrainH3224高產(chǎn)菌株H32的發(fā)酵分析240,2107180曲∑150簍120羹囂憔30出發(fā)菌H320lO203040506070時間/Il圖3高產(chǎn)突變菌H32和出發(fā)菌搖瓶發(fā)酵赤蘚糖醇濃度曲線Fig3Erythritolproductionfe
14、rmentedbybighy蛔IdmutantstrainH一32andoriginalstrain由圖3可以看出,在發(fā)酵前期,出發(fā)菌的發(fā)酵水平略高于高產(chǎn)菌,此階段菌體均處于生長期。但到了中后期高產(chǎn)菌H一32產(chǎn)量迅速上升,到60h時達到高峰期,產(chǎn)物積累刪2289/L,60h后趨于平緩下降,而出發(fā)菌發(fā)酵能力只能維持到55h左右。3結(jié)論N誘變育種與傳統(tǒng)物理法及化學(xué)誘變劑相比,具有損傷輕、突變率高、突變譜寬、遺傳穩(wěn)定,易于獲得理想菌株等特蒯n
15、】。實驗通過運用N牲入技術(shù)誘變赤蘚糖醇產(chǎn)生菌,獲得一株高產(chǎn)突變菌株H32,赤蘚糖醇產(chǎn)量高達2289/L2E右,副產(chǎn)物甘油僅為321班,且遺傳穩(wěn)定,目前處于國內(nèi)最好水平,為下一步培養(yǎng)基優(yōu)化及工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。研究表明,在Ⅳ注入(15keV,80x104cmO劑量下,誘變的正突變率較高,可達到346%。參考文獻:【1】MOONHI,JEYAMKIMIW,eta1Biotechnologicalproductionofcrythdtolan
16、ditsapplications叨AppiMicrobiolBiot,2010,86(4):1017—1025【2】唐瓔,孟憲剛新型天然生物功能食品添加劑的研究與開發(fā)【J】食品工業(yè)科技,2011(3):432437【3】SAVERGAVELS,GADRERV,NARAYANANBKeta1Strainimprovementandstatisticalmediaoptimizationforenhancedewthritolproduct
17、ionwithminimalbyproductsfromCand/damagno//aemutantR23[f1BioehemEngJ,201l,55(22):92100【4】宋道軍離子注入效應(yīng)研究陰核技術(shù),1999,22(3):129132[5】5余增亮離子柬與生命科學(xué)——一個新的研究領(lǐng)域忉物理,1997,26(6):333338【6】6胡永紅,楊文革,孟小琴一種從酵母發(fā)酵液中分離純化赤蘚糖醇的方法唧中國:CNl02249856A,2
18、01l1123【7】HUYHJIANGXMYANGWG,eta1Solubilityofev:hritotindiffereat越lu∞璐solventmixtu惜[f1JMolLiq,2012,169:7479[8】8楊垂緒,梅曼彤太空放射生物學(xué)口田廣州:中山大學(xué)出版社,1995【9】WU1J,RANDERSPEHRSONG,XUA’da1Targetedcytoplasmicitradiationwithalphaparticles
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 低能氮離子注入誘變選育云芝新菌株的研究.pdf
- 氮離子注入誘變小麥的研究.pdf
- 紫外誘變及電融合法構(gòu)建赤蘚糖醇高產(chǎn)菌株的研究.pdf
- 離子注入慶大霉素產(chǎn)生菌的誘變實驗研究.pdf
- 離子注入誘變選育組成型海因酶高效菌.pdf
- 離子束注入篩選黃霉素高產(chǎn)菌.pdf
- 光皮樺離子注入誘變育種研究.pdf
- 陸地棉花粉氮離子注入誘變效應(yīng)及機理研究.pdf
- 赤蘚糖醇高產(chǎn)菌株的選育及發(fā)酵條件的研究.pdf
- 離子注入D-核糖產(chǎn)生菌的誘變效應(yīng)及作用機理研究.pdf
- 低能離子注入雙酶產(chǎn)生菌Spj0104的誘變選育研究.pdf
- 截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌株重離子誘變及高通量篩選.pdf
- 低能離子注入擬南芥的誘變效應(yīng)和機理研究.pdf
- 甜菜離子注入誘變高糖突變體耐旱性和RAPD標(biāo)記篩選.pdf
- 阿維菌素高產(chǎn)菌株的誘變篩選及生產(chǎn)工藝的優(yōu)化.pdf
- 甘薯生粉直接發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸及高產(chǎn)菌株的誘變篩選.pdf
- 杏樹氮離子注入轉(zhuǎn)化抗寒基因初步研究.pdf
- 12800.離子注入對玉米種質(zhì)誘變效應(yīng)的研究
- 氮離子注入單晶硅的性能研究.pdf
- 猴頭菌麥角甾醇高產(chǎn)菌株篩選及代謝調(diào)控的研究.pdf
評論
0/150
提交評論