應用TLR8配體增強Lewis肺癌小鼠抗腫瘤免疫應答.pdf

1、目的:探討應用TLR8配體CL075(thiazoloquinolinecompound)和Poly(dT)(thymidinehomopolymerphosphorothioateODN)刺激后,TLR8及其相關(guān)細胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4細胞中的表達情況;建立小鼠Lewis肺癌模型,觀察TLR8配體對腫瘤生長的影響,并研究其調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫應答的機制,為臨床對肺癌的治療提供新的思路和實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:(

2、1)常規(guī)培養(yǎng)DC2.4細胞,光學顯微鏡觀察未刺激組、Poly(dT)刺激組、CL075和Poly(dT)共同刺激組細胞的形態(tài)變化。(2)通過qRT-PCR測定DC2.4細胞hhTLR8、IL-12、IL-10的mRNA表達。(3)通過ELISA測定DC2.4細胞中IL-12、IL-10的蛋白表達。(4)通過Westernblot測定DC2.4細胞中TLR8的蛋白表達。(5)建立小鼠Lewis肺癌模型,觀察經(jīng)TLR8配體處理后腫瘤的發(fā)展進

3、程。(6)取各實驗組小鼠引流淋巴結(jié)及脾臟利用qRT-PCR法檢測TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表達水平。(7)采用流式細胞術(shù)檢測小鼠體內(nèi)DC細胞TLR8的表達、CD3+CD8+IFNу+T細胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞的變化情況。
　　 結(jié)果:(1)未刺激及Poly(dT)刺激組細胞較幼稚,樹突較短且少;CL075和Poly(dT)刺激組細胞活化,樹突增多且伸長。(2)Poly(dT)刺激組DC2.

4、4細胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表達量與陰性對照組相比均無統(tǒng)計學意義;CL075和Poly(dT)刺激組DC2.4細胞中TLR8、IL-12的mRNA及蛋白表達量較陰性對照組明顯升高(P＜0.05或P＜0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表達量則明顯低于陰性對照組(P＜0.01或P＜0.05)。(3)CL075和Poly(dT)能夠有效地延緩Lewis肺癌小鼠體內(nèi)腫瘤的進展,抑制腫瘤的生長。qRT-PCR及F

5、CM檢測結(jié)果顯示,經(jīng)CL075和Poly(dT)處理后,其局部引流淋巴結(jié)、脾臟中TLR8、IL-12的mRNA表達水平明顯增加,而IL-10的mRNA表達水平下降;DC表面TLR8的表達、CD3+CD8+IFNу+T細胞的比例明顯上升;淋巴結(jié)中CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞的比例明顯下降,而脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞的比例與對照組相比無明顯差異。
　　 結(jié)論:(1)應用TLR8配體后,TLR8、