CR16在睪丸組織中的表達及其與無精子癥發(fā)病相關性的初步探討.pdf

1、目的：檢測糖皮質激素區(qū)域表達基因16 (Corticosteroids and regional expression 16，CR16)在正常SD大鼠睪丸組織中的表達，為后續(xù)研究CR16在人類生殖系統(tǒng)的表達提供前期動物實驗及方法學準備。
　　 方法：采用免疫組織化學法檢測CR16蛋白在5只正常SD大鼠睪丸組織中的表達情況。
　　 結果：CR16蛋白表達于大鼠睪丸生精小管上皮，主要分布在支持細胞、支持細胞與生精細胞連接區(qū)(

2、Sertoli cell-spermatid junctions，SspJs)。
　　 結論：CR16在大鼠睪丸組織中定位于支持細胞及SspJs，提示CR16可能參與精子發(fā)生過程。
　　 實驗二 CR16在無精子癥患者及正常男性睪丸組織中的定位及定量表達
　　 目的：研究CR16在非梗阻性無精子癥患者、梗阻性無精子癥患者及正常男性睪丸組織中的定位及定量表達，探討CR16與無精子癥發(fā)病的相關性。
　　 方法

3、：采用免疫組織化學法和逆轉錄－聚合酶鏈反應（reverse transcript polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測CR16蛋白和CR16 mRNA在6例非梗阻性無精子癥患者、23例梗阻性無精子癥患者和6例正常男性睪丸組織中的表達情況。
　　 結果：CR16蛋白表達于睪丸生精小管上皮，主要分布在支持細胞胞漿、胞膜及SspJs，非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16蛋白的表達明顯弱于梗阻性無精癥

4、患者及正常男性。非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16 mRNA的表達（0.640±0.021）顯著弱于正常男性（0.952±0.036）（P<0.01），梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16 mRNA的表達（0.953±0.036）與正常男性睪丸組織中CR16 mRNA的表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 結論：非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16表達水平顯著降低，提示CR16可能與非梗阻性無精子癥的發(fā)病有著相關性

5、，可能參與精子發(fā)生障礙。
　　 實驗三 CR16在無精子癥發(fā)病機制中的初步探討
　　 目的：研究神經型威奧綜合征蛋白(neural Wiscott-Aldrich syndrome protein，N-WASP）在非梗阻性無精子癥患者及正常男性睪丸組織中的定位及定量表達，探討CR16與N-WASP在人睪丸組織中的相關性及其在精子發(fā)生中的作用。
　　 方法：采用免疫組織化學法和RT-PCR法檢測N-WASP mRN

6、A在6例非梗阻性無精子癥患者和6例正常男性睪丸組織中的定位及定量表達；用免疫熒光雙標記法及激光掃描共聚焦顯微鏡（laser scanning confocal microscopy，LSCM）觀察CR16與N-WASP在非梗阻性無精子癥患者和正常男性睪丸組織中的共表達情況。
　　 結果：N-WASP蛋白表達于睪丸生精小管上皮，主要分布在支持細胞胞漿、胞膜及SspJs，非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中N-WASP蛋白的表達明顯弱于正

7、常男性。非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中N-WASP mRNA的表達（0.645±0.025）顯著弱于正常男性（0.960±0.031）（P<0.01）。CR16 mRNA與N-WASP mRNA在非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中的相對表達量約為1：1，二者在正常男性睪丸組織中的mRNA相對表達量也約為1：1。免疫熒光雙標結果顯示，CR16與N-WASP在睪丸SspJs處的表達相疊加，說明二者是以復合物的形式存在于人類睪丸組織中。