小檗胺和小檗胺衍生物抗骨髓瘤細胞增殖及其機制的研究.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院博士學位論文小檗胺和小檗胺衍生物抗骨髓瘤細胞增殖及其機制的研究姓名：梁赟申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（血液?。┲笇Ы處煟黑w小英20100401浙江大學博士學位論文摘要到多種與細胞增殖分化密切相關(guān)的信號通路，這些分子機制的發(fā)現(xiàn)提示BBM可能具有更廣泛的抗腫瘤譜。同時，小檗胺為一種天然的小分子化合物，其結(jié)構(gòu)式公開，可以對其進行化學結(jié)構(gòu)修飾從而產(chǎn)生系列小檗胺衍生物。本研究首次以入骨髓瘤細胞株為研究對象，探討小檗胺體外抗骨髓瘤作

2、用及其可能機制，并從小檗胺衍生物中篩選出高效低毒的抗骨髓瘤的先導化合物，進一步從分子水平明確小檗胺衍生物對腫瘤相關(guān)信號通路的影響及可能的作用靶位，從而為后續(xù)新型抗骨髓瘤藥物的研發(fā)奠定實驗基礎(chǔ)。第一部分小檗胺抗骨髓瘤細胞增殖及其機制的研究目的：研究小檗胺對人骨髓瘤細胞株增殖抑制和誘導凋亡的作用并探討其相關(guān)機制。方法：MTT法檢測小檗胺單用及聯(lián)合常規(guī)抗骨髓瘤藥物(地塞米松，阿霉素，砷劑)對人骨髓瘤細胞株KM3，RPMl8226和U266的增

3、殖抑制作用；Wright—Giemsa染色觀察藥物作用前后細胞形態(tài)學改變；流式細胞術(shù)分析細胞周期及凋亡細胞百分比；間接免疫熒法觀察BBM干預(yù)后p65蛋白改變及亞細胞定位；Westernblot檢測BBM作用前后p65，IrBtx激酶a(IrBakinase，IKKot)，Ird3ct，P—IrBa，TNFAIP3(A20)，cyclinD1，Bcl2，BAX，BclXL，Bid及survivin蛋白的表達。結(jié)果：BBM可以抑制KM3，R

4、PMl8226和U266細胞的增殖，呈濃度依賴及時間依賴性，48h對三株細胞的IC50值分別為509I_tg／ml，38399／ml，471／tg／ml，并且低劑量的BBM與常規(guī)化療藥物聯(lián)合48h后可以增加抗腫瘤效應(yīng)；流式細胞術(shù)檢測BBM作用后KM3細胞發(fā)生G1／S期阻滯，8pg／mlBBM作用36h后KM3細胞凋亡率從對照組的054％升至5183％，并且光鏡下可見凋亡特征性形態(tài)學改變；8“∥mlBBM作用KM3細胞24h后能明顯下調(diào)I