水飛薊賓對硝普鈉所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本文系統(tǒng)地研究了水飛薊賓(Silibinin)體外抗PC12凋亡的分子機(jī)制，著重闡述了在硝普鈉(Sodiumnitroprusside，SNP)誘導(dǎo)的分化的PC12細(xì)胞凋亡過程中，水飛薊賓起保護(hù)作用的分子機(jī)理。 水飛薊賓是天然的多酚黃酮類化合物，為菊科植物水飛薊((Silybummarianum)的果實(shí)經(jīng)提取精制而得，其主要作用為膜穩(wěn)定性及抗氧化作用。目前為止常被用于肝臟保護(hù)劑，但是除此外水飛薊賓還具有其他的活性，如抗癌，心臟保

2、護(hù)及腦保護(hù)作用。 鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞系是來源于腎上腺髓質(zhì)的嗜鉻細(xì)胞，被廣泛應(yīng)用作交感神經(jīng)節(jié)樣神經(jīng)元的模型。一氧化氮(NO)可導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，并參與到了一系列的神經(jīng)病理學(xué)過程中，包括腦缺血，神經(jīng)退行性疾病等。硝普鈉可作為體外NO的供體，在許多實(shí)驗(yàn)中被用作誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷的模型藥物。 結(jié)果表明，我們采用全反式維甲酸(All-transretinoicacid，ATRA，RA)可以明顯誘導(dǎo)PC12細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞分化，

3、硝普鈉對于分化后的PC12細(xì)胞具有明顯的抑制作用，并誘導(dǎo)了PC12細(xì)胞的壞死和凋亡，且此抑制作用以凋亡為主。形態(tài)學(xué)觀察，流式細(xì)胞術(shù)和WesternBlot分析均顯示硝普鈉可引起PC12細(xì)胞DNA損傷，誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。在硝普鈉誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的過程中，caspase-8，-9和-3的含量呈時(shí)間依賴性的增加，上調(diào)了Bax蛋白在線粒體的分布，降低了線粒體膜電位，并同時(shí)促進(jìn)了細(xì)胞色素c由線粒體釋放到胞漿中，說明此凋亡的發(fā)生是同時(shí)激活了死亡受

4、體通路和線粒體通路。 而加入水飛薊賓后，可明顯抑制硝普鈉誘導(dǎo)的caspase-8，-9，和-3的活化，提高了線粒體膜電位，抑制了凋亡，同時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)了自噬的高水平。形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞術(shù)和WesternBlot分析表明，此凋亡保護(hù)作用主要是通過活化Ras蛋白來實(shí)現(xiàn)的，Ras活化后，激活了下游的PI3K/NF-kB途徑和Raf-1/MEK/ERK途徑，這兩條通路均起到了保護(hù)細(xì)胞的作用，但其機(jī)理有所差異，PI3K/NF-kB途徑可