MAP4K4在膀胱癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:膀胱癌是目前世界上第九大癌癥,每年約有15萬人死于膀胱癌。膀胱癌在中國的發(fā)病率和死亡率均占泌尿系腫瘤的首位,目前,中國男性膀胱癌的年發(fā)病率已達(dá)十萬分之八,并呈逐年上升的趨勢。約70%為表淺腫瘤(Ta、T1、Tis),這其中有50%-70%會復(fù)發(fā),有10-20%進(jìn)展為肌層侵潤性腫瘤(T2-T4),根治性膀胱切除術(shù)后5年內(nèi)約有1/3會死于膀胱癌,可見膀胱癌是一種常見且復(fù)發(fā)率及死亡率較高的疾病,從基因水平進(jìn)行疾病的預(yù)防、診斷、治療具有巨

2、大的經(jīng)濟(jì)及社會價值。
   方法:首先,采用基因芯片技術(shù)對5對膀胱癌及癌旁組織的基因表達(dá)譜進(jìn)行初步研究,對比癌和癌旁組織的差異基因表達(dá),篩選與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)基因。然后,采用PCR和Western blot技術(shù)進(jìn)一步從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測16對膀胱癌及癌旁組織中MAP4K4的表達(dá)情況,驗證基因芯片的結(jié)果,并在156例石蠟包埋肌層浸潤性膀胱癌切片中通過免疫組化檢驗MAP4K4的蛋白表達(dá)情況,并觀察臨床病理參數(shù)與MAP4K4蛋白表

3、達(dá)水平的關(guān)系,以初步證實MAP4K4的臨床相關(guān)性。最后,通過慢病毒包裝的MAP4K4靶向shRNA轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞系T24,通過RT-PCR及Western blot驗證干擾效率,篩選MAP4K4靶向干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,研究MAP4K4基因靶向干擾對膀胱癌細(xì)胞株T24生物學(xué)活性的影響:MTT檢測細(xì)胞增殖能力、Transwell法檢測細(xì)胞侵襲能力、流式細(xì)胞檢測細(xì)胞周期或凋亡,并初步討論發(fā)揮影響的機(jī)制。
   結(jié)果:首先通過基因芯片技

4、術(shù)篩選出在膀胱癌與癌旁組織差異表達(dá)的基因MAP4K4,說明該基因與膀胱癌的發(fā)生或發(fā)展可能有關(guān)。然后用新鮮膀胱癌及癌旁組織通過PCR及Western blot方法驗證了基因芯片的結(jié)果:即MAP4K4在膀胱癌組織中的表達(dá)無論從mRNA水平還是蛋白水平均高于癌旁組織。通過對石蠟包埋病理切片的免疫組化研究發(fā)現(xiàn),MAP4K4在肌層浸潤性膀胱癌中普遍高表達(dá),并且該基因高表達(dá)與淋巴血管侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),與多發(fā)腫瘤及分期相關(guān),在淋巴結(jié)陰性的肌層

5、浸潤性膀胱癌中是獨立于病理分期的預(yù)后不良因子。這說明了MAP4K4基因具備重要了臨床相關(guān)性,值得進(jìn)一步研究。最后建立了MAP4K4靶向干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,顯示靶向干擾該基因后細(xì)胞增殖變慢,細(xì)胞侵襲力減弱,凋亡增加。
   結(jié)論:MAP4K4是一個與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因;MAP4K4的高表達(dá)與淋巴血管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),在淋巴結(jié)陰性的肌層浸潤性膀胱癌中有重要的判斷預(yù)后的價值;在膀胱癌細(xì)胞系中靶向干擾該基因后細(xì)胞增殖減慢,

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