以兩親性聚膦腈為載體的阿霉素膠束的制備及體外評(píng)價(jià).pdf

1、實(shí)驗(yàn)參考先前合成兩親性聚膦腈接枝共聚物的方法，使用三氯化鋁作為催化劑，聚(二氯代膦腈)通過(guò)熱開(kāi)環(huán)反應(yīng)聚合，通過(guò)兩步親核取代反應(yīng)，合成了以聚膦腈為骨架，聚乙二醇(PEG)為親水鏈段，色氨酸乙酯(EtTrp)為疏水鏈段的兩親性接枝共聚物。通過(guò)改變PEG和EtTrp的投料比，實(shí)驗(yàn)合成了三個(gè)具有不同親疏水組成的兩親性聚膦腈接枝共聚物(PEG/EtTrp-PPPs)。采用紅外光譜、1H-NMR、紫外掃描光譜分別對(duì)合成的聚合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。結(jié)合紫外

2、分光光度法測(cè)定兩親性接枝聚膦腈的親疏水組成(EtTrp：PEG)分別為0.67：1.33，0.99：1.0l和1.22：0.78。實(shí)驗(yàn)采用芘熒光探針?lè)?、?dòng)態(tài)光散射儀(DLS)、透射電鏡(TEM)研究了該系列共聚物的在水中的自組裝情況。芘熒光探針?lè)y(cè)得的共聚物的最低臨界膠束濃度(CMC)分別為：0.158，0.033和0.02g/L，對(duì)于不同EtTrp取代的共聚物，其CMC隨著疏水鏈段EtTrrp比例的增大而降低。粒徑測(cè)定結(jié)果表明，該系列

3、共聚物在水中自組裝形成的膠束粒子粒徑呈單分布狀態(tài)，范圍在20-40 nm內(nèi)，TEM觀察結(jié)果顯示粒子呈球形。 利用上述合成的兩親性聚膦腈接枝共聚物(PEG/EtTrp-PPPs)為聚合物材料，阿霉素為模型藥物，分別采用透析法和o/w乳化法制備阿霉素膠束。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該體系聚合物膠束用乳化法制備得到的載藥量較高。實(shí)驗(yàn)對(duì)乳化法進(jìn)行了優(yōu)化，并且對(duì)載藥過(guò)程中不同的影響因素進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著投藥量的增加，聚合物載藥量也增加，但是

4、到達(dá)一定比例后包封效率并沒(méi)有隨著增加，藥物與聚合物材料質(zhì)量比(DOX/polymer)為4：10時(shí)，阿霉素的包封率達(dá)到最大值。三組不同親疏水鏈段的聚合物對(duì)于阿霉素的負(fù)載都表現(xiàn)出相似的趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)合動(dòng)態(tài)光散射儀(DLs)、透射電鏡(TEM)對(duì)載藥聚合物膠束的形態(tài)以及粒徑分布進(jìn)行了考察。結(jié)果顯示，載藥過(guò)程使聚合物膠束的粒徑增大，而且隨著載藥量的增加，粒徑增大明顯。載藥過(guò)程增加了膠束的穩(wěn)定性，TEM觀察呈分散較好的球狀膠束。 本課題還

5、對(duì)阿霉素聚合物膠束的體外釋放特征進(jìn)行了考察。分別選取不同pH(5.0，6.8，7.4，8.0)的磷酸緩沖鹽溶液作為釋放介質(zhì)考察載藥膠束在不同pH環(huán)境下的釋放特征，并且對(duì)高、中、低不同載藥量的阿霉素膠束體外釋放特征進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，載藥聚合物膠束在體外的釋放具有pn依賴性，表現(xiàn)為較低pH情況下，聚合物膠束內(nèi)部的阿霉素快速釋放，累積釋放百分率高；隨著pn的升高，累積釋放百分率逐漸降低。pH5.0，pH 6.8，pH 7.4以及pH 8.

6、0的釋放條件下，聚合物膠束在72 h內(nèi)的累積釋放百分率分別為59.2±2.O％，30.1±1.6％，23.4±1.3％和17.7±1.5％。這是由于在低pH下，內(nèi)核中疏水性的阿霉素發(fā)生解離，很大程度地提高了溶解度，促進(jìn)阿霉素進(jìn)一步地釋放．對(duì)于抗腫瘤給藥體系，這種pH敏感特性能夠使藥物更好地在腫瘤組織釋放，發(fā)揮腫瘤抑制作用，而降低對(duì)正常細(xì)胞跟組織的毒副作用．實(shí)驗(yàn)還考察了高、中、低三種不同載藥量的阿霉素聚合物膠束在pH 7.4下的釋放，結(jié)果

7、顯示48 h內(nèi)低載藥量的阿霉素膠束累積釋放百分率較高，為55.8％，而高載藥量的阿霉素膠束累積釋放較少，48h累積釋放百分率只有21.8％。不同親疏水組成的聚合物材料制備得到的載藥膠束體外釋放有略微的差別，在pH 5.O和pn 7.4條件下，主要表現(xiàn)為：疏水性片段含量較高的PEG/EtTrp-PPP-3制備得到的阿霉素膠束較。PEG/EtTrp-PPP-l和PEG/EtTrp-PPP-2制備得到的阿霉素膠束釋放緩慢。 實(shí)驗(yàn)考察了

8、兩親性聚膦腈接枝共聚物(PEG/EtTrp-PPPs)對(duì)Hela細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，三種不同親疏水組成的：PEG/EtTrp-PPPs作用于Hela細(xì)胞48 h后沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性。不同濃度的PEG/EtTrp-PPP-1與細(xì)胞作用24 h，48 h，72h后均沒(méi)有表現(xiàn)出細(xì)胞生長(zhǎng)抑制，細(xì)胞生長(zhǎng)率均在90％以上。結(jié)果表明該系列兩親性接枝共聚物生物相容性好，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有影響。體外細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)O/W乳化法將阿霉素包封在