siRNA抑制大鼠雪旺細(xì)胞CⅡTA基因的表達(dá)及其意義的研究.pdf

1、周圍神經(jīng)長(zhǎng)段缺損至今仍是外科治療中的難題。目前自體神經(jīng)移植是修復(fù)神經(jīng)缺損的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。但由于自體神經(jīng)移植來(lái)源有限且造成供區(qū)損傷，臨床應(yīng)用受到很大限制。20世紀(jì)80年代末，在組織工程學(xué)的快速發(fā)展的背景下，提出了人工神經(jīng)的概念，即由具有良好生物相容性的可降解高分子載體，結(jié)合以雪旺細(xì)胞為主的活性細(xì)胞，形成具有特定三維結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，用于修復(fù)周圍神經(jīng)缺損。 采用同種異體雪旺細(xì)胞構(gòu)建人工神經(jīng)是修復(fù)周圍神經(jīng)缺損常用的方法，雪旺細(xì)胞對(duì)神經(jīng)再生十分

2、關(guān)鍵，但宿主的免疫排斥反應(yīng)常會(huì)影響雪旺細(xì)胞的存活和生物活性的保持，從而影響人工神經(jīng)的效果。 Mosahebi等研究表明在充滿同種異體雪旺細(xì)胞的人工神經(jīng)支架上，第三周開(kāi)始MHC Ⅱ類抗原的表達(dá)明顯增加，并伴有T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)通過(guò)熒光免疫染色明確受到排斥的是同種異體雪旺細(xì)胞。因此MHC Ⅱ類基因是影響同種異體雪旺細(xì)胞存活和活性的重要因素。 有人曾試用免疫抑制劑來(lái)延長(zhǎng)雪旺細(xì)胞的存活時(shí)間，雖然具有短期效果，但免疫抑

3、制可使再生的軸突發(fā)生變性、潰解，長(zhǎng)期效果不佳4。RNA干擾是通過(guò)雙鏈RNA(dsRNA)在細(xì)胞內(nèi)被Dicer核酶切割成長(zhǎng)約21-23個(gè)核苷酸的siRNA，進(jìn)而形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)，然后雙鏈siRNA解旋，反義siRNA鏈引導(dǎo)RISC通過(guò)堿基配對(duì)與同源mRNA結(jié)合，并使其降解，這種序列特異性的mRNA降解導(dǎo)致同源基因沉默。因此RNA干擾可以高效抑制移植過(guò)程中會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)特定基因的表達(dá)，從而降低同種異體細(xì)胞的免疫原性。

4、 CⅡTA參與MHCⅡ類基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控，是構(gòu)成型和誘導(dǎo)型MHCⅡ類基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)因子。June等7研究表明CⅡTA基因敲除的同種異體心臟移植存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。因此CⅡTA基因是抑制MHCⅡ類基因表達(dá)的理想靶點(diǎn)。 構(gòu)建表達(dá)載體是進(jìn)行長(zhǎng)期研究的唯一方法，載體進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，依賴于RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子(pol Ⅲ)中的一種，所插入的寡核苷酸鏈能夠形成發(fā)夾狀RNA，后者在細(xì)胞內(nèi)RNA酶的作用下被切割成與體外合成的siRN