超聲微泡介導(dǎo)雙報(bào)告基因在椎間盤(pán)髓核中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、基因治療椎間盤(pán)退變疾病日益引起人們關(guān)注，多種載體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的研究在體內(nèi)和體外都取得了一定的結(jié)果，但真正安全、高效并能應(yīng)用于臨床的載體仍需大量研究。 目的:探索外源性基因能否在超聲微泡介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染SD大鼠椎間盤(pán)細(xì)胞。 設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn)隨機(jī)對(duì)照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。2008年3月-2008年12月在重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成。 方法:40只SD大鼠被隨機(jī)分為4組。第1組僅于髓核內(nèi)注入含雙報(bào)告基因（含有綠色熒光蛋白和螢火

2、蟲(chóng)熒光素酶編碼片段）的質(zhì)粒；第2組為在第1組基礎(chǔ)上加超聲照射；第3組同時(shí)注入含雙報(bào)告基因的質(zhì)粒和微泡的混懸液；第4組為在第3組基礎(chǔ)上加超聲照射。每只大鼠未接受手術(shù)和照射的第4、5椎間盤(pán)作為對(duì)照。 主要觀察指標(biāo)一周后處死大鼠，取出全部椎間盤(pán)組織做熒光素酶活性檢測(cè)，針對(duì)GFP的mRNA做PCR擴(kuò)增，做病理切片用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:熒光素酶活性檢測(cè)顯示：第4組即超聲+微泡+質(zhì)粒組（96.7×103±72.

3、3×103）熒光素酶活性最高，與第1組（8.7×103±7.2×103）、第2組（3.1×103±2.4×103）、第3組（47.5×103±43.3×103）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；PCR結(jié)果顯示第4組標(biāo)本中GFP獲得了最高的表達(dá)，而在質(zhì)粒+超聲組合的第3組表達(dá)量最低；熒光顯微鏡下觀察，四個(gè)實(shí)驗(yàn)組的熒光強(qiáng)度變化趨勢(shì)與熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果和PCR結(jié)果一致。 結(jié)論:超聲微泡介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng)能促進(jìn)外源基因在髓核中的