超聲聯(lián)合微泡造影劑介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：探討不同超聲輻照時(shí)間和微泡劑量與基因轉(zhuǎn)染效率之間的關(guān)系，初步摸索適宜轉(zhuǎn)染的參數(shù)條件。
　　 方法：報(bào)告基因用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白質(zhì)粒（pEGFP），以人肝癌細(xì)胞（HepG2）為研究對象。超聲頻率1MHz，聲強(qiáng)0.5W/cm2，對加入pEGFP和不同劑量微泡造影劑（MB）的HepG2細(xì)胞輻照不同時(shí)間。24h后用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況，流式細(xì)胞儀檢測基因轉(zhuǎn)染效率，臺(tái)盼蘭染色檢測細(xì)胞存活率。

2、r>　　 結(jié)果：各試驗(yàn)組均可見不同程度熒光蛋白表達(dá)，輻照時(shí)間為20s和微泡劑量為60μl時(shí)可達(dá)到較理想的轉(zhuǎn)染效率。
　　 結(jié)論：在超聲頻率和聲強(qiáng)一定條件下，不同超聲輻照時(shí)間和微泡造影劑劑量有不同的基因轉(zhuǎn)染效率,20s、60μl是一個(gè)較理想的參數(shù)，為基因治療進(jìn)一步研究提供了參考。
　　 第二部分
　　 目的：初步探討靜脈注射共聚物Pluronic P85和黏附質(zhì)粒的微泡造影劑（MB），同時(shí)經(jīng)體表給予一定強(qiáng)度的超聲

3、輻照，能否增強(qiáng)輻照部位局部組織的基因轉(zhuǎn)染與表達(dá)。
　　 方法：質(zhì)粒DNA用綠色熒光蛋白質(zhì)粒（pEGFP）。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。含有pEGFP轉(zhuǎn)染液經(jīng)尾靜脈注入。實(shí)驗(yàn)分為3組，第一組：pEGFP +超聲輻照（US）；第二組：pEGFP+MB+超聲輻照（US）；第三組：pEGFP+MB+P85+超聲輻照（US）。脈沖多普勒超聲輻照(1MHz，0.5W/cm2)瘤組織，持續(xù)時(shí)間2min,7d后用活體熒光成像分析系統(tǒng)分析，然后取

4、腫瘤組織快速冰凍切片，熒光顯微鏡計(jì)數(shù)EGFP陽性的細(xì)胞，HE染色評價(jià)其組織損傷情況。
　　 結(jié)果：第二組和第三組有較多的綠色熒光蛋白的表達(dá)，第一組綠色熒光蛋白表達(dá)較少，第三組表達(dá)量高于第一、二組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第二組表達(dá)量高于第一組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HE染色腫瘤組織無壞死灶出現(xiàn)。
　　 結(jié)論：初步得知共聚物Pluronic P85可增強(qiáng)超聲輻照微泡造影劑介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染與表達(dá)，可能具