應用免疫分型芯片對臨床急性白血病細胞膜相關抗原的檢測.pdf

1、目的: 目前白血病的免疫分型診斷主要依靠用已知的單克隆抗體(McAb)去鑒定白血病細胞膜表面或細胞內部的抗原—CD抗原(cluster of differentiation)，根據不同抗原在不同階段的出現與消失，決定白細胞所屬的系列及分化階段，做出免疫學診斷。當前臨床上進行白血病的免疫分型主要是應用流式細胞術及免疫組化技術，其分型受到標本量、價格、程序等的限制，而且一次實驗只能分析1～4個表面抗原，漏掉了大量監(jiān)測機體免疫狀態(tài)的表

2、面抗原指標。隨著生物芯片技術的發(fā)展，學者們開始應用這種高通量、并行性、集成化的技術平臺進行白血病的免疫分型研究。本實驗構建的用于急性白血病免疫學分型的細胞芯片就是利用抗原、抗體特異性結合的原理，將白細胞表面分化抗原單克隆抗體固定于載體上，形成抗體點陣。不同的單克隆抗體能夠自動識別并捕獲表達相應表面分化抗原的細胞，從而對白血病進行免疫學分型。將芯片的診斷結果與臨床對急性白血病患者外周血白細胞的系列分型結果進行比較，驗證芯片診斷的準確性。同

3、時采用免疫熒光細胞化學技術對芯片捕獲的白血病細胞膜表面相關抗原CD6、LTK、CaSR的表達進行檢測，旨在為臨床診斷、靶向治療及預后提供快速、簡便、完整、準確的免疫學資料。 方法: 結合本實驗室現有抗體情況對國際上公認的急性白血病免疫分型的一線、二線抗體進行篩選，采用最佳的抗體點陣組合構建急性白血病免疫分型芯片。 用急性白血病免疫分型芯片對35例臨床初診的急性白血病人的外周血進行免疫分型：提取的白細胞經吖啶橙染色

4、后孵育芯片，熒光圖像掃描儀掃描觀察點陣捕獲細胞的情況，確定細胞膜上抗原的表達。瑞氏—姬姆薩染色后顯微鏡下觀察芯片上各抗體點捕獲細胞的形態(tài)，免疫學結果與形態(tài)學相結合進行分型并與臨床檢測結果進行比較。 檢測35例臨床急性白血病患者外周血白血病細胞膜表面CD6、LTK、CaSR三種膜相關抗原的表達情況：對芯片捕獲的白血病細胞采用間接免疫熒光法檢測膜相關抗原并在熒光顯微鏡下觀察結果。 結果: 急性白血病免疫分型芯片的點陣

5、抗體為：T—ALL：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8—1、CD8—2、TCRαβ、TCRδγB—ALL：CD10、CD19、CD20、CD22、CD24、CD79b、k、λAML：CD13、CD14、CD15、CD33、CD41、CD61、CD64、CD103、CD235a非系列特異性：TdT、HLA—DR、CD34 根據熒光圖片掃描儀掃描芯片得到的抗原表達情況并結合顯微鏡下觀察點陣捕獲的細胞形態(tài)，對35例

6、臨床急性白血病患者的外周血進行免疫分型，T—ALL11例，B—ALL14例，AML10例，所得系列分型結果與臨床檢測結果一致，證明了芯片診斷的準確性。 對35例臨床急性白血病患者的外周血進行檢測，細胞芯片上捕獲的白血病細胞采用間接免疫熒光法檢測膜相關抗原，用一抗CD6，LTK，CaSR的濃度為1：30037℃孵育30分鐘，熒光二抗?jié)舛葹?：20037℃孵育20分鐘最佳。熒光顯微鏡下觀察細胞膜表面相關抗原T—ALL表達CD6，B—

7、ALL表達LTK，AML表達CaSR。 結論: 本實驗構建的急性白血病免疫分型芯片對急性白血病的系列分型結果與臨床分型結果一致，急性白血病患者外周血白血病細胞膜表面相關抗原CD6在T—ALL表達、LTK在B—ALL表達、CaSR在AML表達具有特異性，可作為臨床白血病免疫學分型及抗體靶向治療的依據。本實驗室研制的白血病免疫分型細胞芯片重復性和穩(wěn)定性好，為臨床白血病免疫分型提供了一種更快速簡便、高通量、并行性、集成化的技術