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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:研究大豆異黃酮(soy isoflavones, SI)對(duì)糖尿病大鼠心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣離子調(diào)控蛋白、心肌細(xì)胞膜 ATP敏感性鉀通道(KATP)的基因和/或蛋白表達(dá)的影響,探討大豆異黃酮(SI)保護(hù)糖尿病心肌損傷的作用機(jī)制。
方法:雄性 Sprague-Dawley大鼠60只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、糖尿病對(duì)照組(DC)、大豆異黃酮治療組(ST)和尼爾雌醇治療組(NT)。后3組腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotoc
2、in, STZ)55 mg/kg制備糖尿病模型,監(jiān)測(cè)血糖持續(xù)在16.7 mmol/L以上者為糖尿病大鼠。第7周起,NC、DC組予0.5%CMC-Na10 ml.kg-1.d-1, ST組予大豆異黃酮120 mg.kg-1.d-1,NT組予尼爾雌醇混懸液每周0.2 mg·kg-1灌胃兩次,連續(xù)給藥6周。第12周末記錄離體心臟室內(nèi)壓曲線并分析。取心室肌組織,應(yīng)用 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)心肌肌漿網(wǎng)鈣離子調(diào)控蛋白諸如肌漿網(wǎng) Ca2+-ATP酶(s
3、arco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase, SERCA)、受磷蛋白(phospholamban, PLB)、蘭尼堿受體2型(ryanodine receptor type2, RyR2),1,4,5-三磷酸肌醇受體2型(1,4,5-trisphosphate inositor type2, IP3R2)及三磷酸腺苷敏感性鉀通道(KATP)的磺脲類受體2(SUR2)和內(nèi)向整流型鉀離子通道6.2(Kir6
4、.2)基因表達(dá);應(yīng)用免疫組化Elivision法檢測(cè)SERCA2a蛋白的表達(dá);觀察心肌組織的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的變化。
結(jié)果:1.大鼠體重DC組明顯低于正常對(duì)照組,ST、NT組顯著高于DC組(P<0.01);空腹血糖DC組明顯高于對(duì)照組(P<0.01),ST、NT組血糖雖有降低,但與DC組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。2.心功能各項(xiàng)指標(biāo):左室收縮壓(LVSP)、平均壓(Mean)、室內(nèi)壓最大上升/下降(±dp/dtmax)速率、心
5、肌纖維最大縮短速度(Vpm), DC組明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01),ST、NT組均高于DC組(P<0.01)而左室舒張末壓(LVEDP)、室內(nèi)壓上升達(dá)最大速率所需時(shí)間(t-dp/dt)和時(shí)間常數(shù)(TC),DC組明顯高于NC組(P<0.01),ST、NT組均低于DC組(P<0.01)。3.心肌組織形態(tài)學(xué)的改變:光鏡下,DC組大鼠心肌肌纖維紊亂、空泡變等;電鏡下,DC組肌纖維斷裂、溶解,線粒體腫脹變性,嵴消失,而ST、NT組心肌病變明
6、顯減輕。4. RT-PCR檢測(cè):與NC組比,DC組大鼠心肌SERCA、RyR2、IP3R2 mRNA表達(dá)顯著降低,但PLB mRNA表達(dá)顯著增高(P<0.01)。與DC組比,ST組、NT組大鼠心肌SERCA、RyR2、IP3R2 mRNA表達(dá)顯著增高,而PLB mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01)。ST、NT組KATP的SUR2和Kir6.2表達(dá)水平與DC組及NC相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。5.免疫組化Elivision法檢測(cè)SER
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