依托咪酯誘發(fā)HL-60細胞凋亡以及預處理對其的抑制作用.pdf

1、目的：細胞凋亡存在于多種生理病理過程，對于細胞凋亡的研究可闡明疾病的發(fā)生機制，探索疾病新的治療方法和手段。依托咪酯作為一種靜脈麻醉藥，對血流動力學影響小，且具有一定的神經(jīng)保護作用。但是依托咪酯具有降低皮質醇的作用，因此它的使用受到了一定的關注。實驗證實依托咪酯直接抑制11-β-羥化酶(一種合成皮質醇必需的酶)的活性，誘導劑量(0.3mg/kg)的依托咪酯產生的腎上腺抑制作用可達5-8小時。皮質醇的血漿濃度降低自然影響下丘腦-垂體-腎上腺

2、軸的調節(jié)功能，影響機體對應激的反應，對免疫系統(tǒng)產生間接的抑制作用。另有實驗發(fā)現(xiàn)依托咪酯可以通過抑制T-淋巴細胞增殖及粒細胞功能，直接影響免疫系統(tǒng)。 因此，我們從細胞凋亡的角度，探索依托咪酯的副作用，具有藥理學意義和臨床意義。人急性髓性細胞白血病細胞(HL-60細胞)保持著中性粒細胞和單核細胞的某些免疫特征，而且該細胞株是用于凋亡研究的典型標準株，其凋亡的多種生化反應步驟已得到確立。觀察依托咪酯對HL-60細胞的作用，既可以反映依

3、托咪酯對免疫細胞的直接作用，又有利于研究其具體的凋亡機制。此外，本研究用小劑量的依托咪酯預處理HL．60細胞，觀察此方法是否對HL-60細胞凋亡具有抑制作用，以便尋找降低依托咪酯副作用的新途徑。 方法：正常培養(yǎng)HL-60細胞，濃度調節(jié)至1.5×10<'5>/ml，按照不同的處理方法進行分組：1．對照組：僅在無依托咪酯的正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h；2．預處理組：用含1μM依托咪酯的培養(yǎng)基預處理1h，洗去依托瞇酯后在培養(yǎng)基中恢復4h，再

4、用含500μM依托咪酯的培養(yǎng)基刺激24h；3．損傷組：僅用含500μM依托咪酯的培養(yǎng)基刺激24h。收集細胞后，分別用MTT法檢測細胞活性，AnnexinV-PI雙染流式細胞法檢測細胞凋亡，Western Blot法檢測caspase-3，8，9的活化。結果：1．MTT實驗結果表明，與對照組相比，預處理組和損傷組的細胞生存率均有下降；但與損傷組相比，預處理組的細胞生存率增高35.35﹪，具有顯著性差異，p<0.01。2．Annexin V

5、-PI雙染流式細胞的實驗結果顯示，與對照組相比，預處理組和損傷組的早期凋亡率和死亡率(1-活細胞率)有所升高；而與損傷組相比，預處理組的早期凋亡率和死亡率分別降低27.48﹪和20.23﹪，有顯著性差異，P<0.01。3．WesternBlot實驗結果顯示，與對照組相比，依托咪酯刺激后，procaspase-3發(fā)生活化，表達減少，而caspase-8、9活化片段的表達增多；但是預處理組比損傷組的procaspase-3表達增多，casp