2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、Lj-RGD3為七鰓鰻口腔腺中發(fā)現(xiàn)的RGD毒素蛋白,含有三個(gè)RGD模體序列,且與富含組氨酸糖蛋白(HRG)有一定序列同源性。本課題旨在探討Lj-RGD3類HRG的抑制血管新生功能和抑菌功能。為了研究其結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,本文對(duì)野生型Lj-RGD3進(jìn)行了RGD及組氨酸His的缺失突變,合成了六種突變體,包括:缺失全部His,并缺失或者保留三個(gè)RGD的Lj-26和Lj-27;保留全部His,缺失三個(gè)RGD的Lj-112,以及分別只保留第1位,

2、第2位和第3位RGD的Lj-113,Lj-114和Lj-115。將這六種突變基因全序列合成后,構(gòu)建于載體pET-23b中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)可溶性蛋白,然后經(jīng)組氨酸親和層析進(jìn)行純化。
  抗血管新生功能實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果:用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,結(jié)果顯示,rLj-RGD3的六種突變體蛋白均能在一定程度上抑制堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的增殖,并且呈劑量依賴性。用雞絨毛尿囊膜(CAM)模型研究這七種蛋

3、白的體內(nèi)抗血管新生功能,結(jié)果顯示,用等量的蛋白去處理雞胚,除rLj-26外,rLj-RGD3與其他五種突變體蛋白均能抑制雞胚的血管新生,其中rLj-112和rLj-27的作用更加明顯??寡苄律肿庸餐奶攸c(diǎn)就是它們能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn)。本文用Transwel板檢測(cè)各蛋白對(duì)bFGF誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)的抑制作用,浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)中,在Transwell板中包被人工基底膜基質(zhì)Matrigel來(lái)模仿體內(nèi)環(huán)境。結(jié)果顯示,除rLj-2

4、6外,rLj-RGD3與其他五種突變體蛋白均能抑制HUVEC細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn),其中rLj-112和rLj-27的抑制率較高。因此可以得出結(jié)論:除rLj-26,野生型rLj-RGD3與其他五種突變體蛋白均具有抑制血管新生功能,且突變體Lj-112和Lj-27都表現(xiàn)出了較野生型和其他突變體蛋白較高的活性。這表明,rLj-112為類HRG蛋白,可能參與生長(zhǎng)因子信號(hào)通路而抑制血管新生;而rLj-27是RGD毒素蛋白,是以整合素信號(hào)通路行使抗血管

5、新生功能的;同時(shí)存在RGD模體和類HRG結(jié)構(gòu)并沒(méi)有使野生型Lj-RGD3的抗血管新生功能得到增強(qiáng);只含有一個(gè)RGD的突變體蛋白Lj-113、Lj-114及Lj-115的抑制血管新生功能均強(qiáng)于野生型rLj-RGD3,說(shuō)明三個(gè)RGD模體間的抗血管新生功能也不是相互疊加的。
  抑菌功能實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果:采用牛津杯法檢測(cè)rLj-RGD3及其突變體蛋白的抑菌活性,首先選取革蘭氏陰性菌大腸桿菌,革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌和真菌白念珠菌作為試驗(yàn)

6、菌,結(jié)果顯示,野生型rLj-RGD3與其他突變體蛋白均有一定的抑制真菌活性,但沒(méi)有抑制細(xì)菌活性。相較于其他蛋白,突變體rLj-112的抑菌圈最大,且rLj-112抑制白念珠菌的活性是呈劑量依賴性的。采用逐級(jí)稀釋法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),來(lái)檢測(cè)rLj-112對(duì)白念珠菌最小抑菌濃度(MIC)及抑制率。結(jié)果測(cè)得野生型rLj-RGD3的MIC值為42μM,rLj-112的MIC值為7.7μM,陽(yáng)性對(duì)照酮康唑(ketoconazole)的MIC值為15μM

7、。接著采用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定了rLj-112的殺菌動(dòng)力學(xué)(Time-kill)曲線,結(jié)果顯示,1×MIC和2×MIC的rLj-112在分別作用12h和6h后,能夠使白念珠菌的生長(zhǎng)減少98%以上,而0.5×MIC的rLj-112在作用24h后,依然不能明顯的抑制白念珠菌。為了觀察rLj-RGD3及其突變體處理后白色念珠菌膜的形態(tài),將白念珠菌與各蛋白30℃孵育后,用掃描電鏡觀察,結(jié)果顯示,與對(duì)照組PBS相比,rLj-112處理過(guò)的白念珠菌在

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