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1、遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文日本七鰓鰻口腔腺分泌蛋白L251的表達(dá)純化及生物學(xué)活性鑒定姓名:薛壯申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師:李慶偉20090501日本七鰓鰻口腔腺分泌蛋白L251的表達(dá)純化及生物學(xué)活性鑒定AbstractThecDNA1ibraryofLampreywasestablishedbyourlaboratoryinearly,aneutrophilinhibitoryfactor(NIF)一1ikeprotein
2、,calledL251,whichisolatedfromthebuccalglandsofLampetrajapoMcaL251isbelongtoCysteine—richsecretoryprotein(CRISPs),Pathogenesis—relatedprotein1(PR一1)bystructurepredictionandsequenceanalysisCRISPsaretwodomainproteinswithast
3、ructurallysimilaryetevolutionarydiverseN—terminaldomainandacharacteristiccysteine—richC—terminaldomain,whichwerefertoastheCrispdomainThecompleteconservedsequenceandfunctionalsitesbetweenL251andNIFweredeterminedbyproteina
4、ndcDNAanalysiSThecDNAwasdirectionallyclonedintothepET23bandtransformedintoEcoliBL21,andexpressionwasinducedbyIPTGAftertheidentificationbySDS—PAGE,therecombinantproteinswerepurifiedbyaspecificHis—TagbindingstepL251wastest
5、edtoinhibitthemigarationofneutrophilthroughcellmonolayerinTranswelltowardsaconcentrationgradientofthechemoattractantfMLPMeantime。neutrophilswasseparatedbyNeutrophi1SeparatingMediumofHumanandLymphocyteSeparatingMediumofHu
6、manThepEFGP—L251vectorwasconstructedfortransfeetionWetransfectedthepEGFP—L251intoHUVECsbyLiposome2000andtestedbyFluorescenceMicroscope,andconstructedaeellmonolayermodelbyTranswellTheresultswhichdetectedbyFlowCytometrysho
7、wedthatL251sharedthesameactivitywithNIFIthaslongbeenknownthatparasiticlampreyssecreteanticoagulantfromtheirbuccalglandsandpreventbloodcoagulationParasitehaveevolveddifferentstrategiestosubvertthehostdefensemechanismsinfa
8、voroftheirownwell一beingTobeginandsustaintheinfectionprocess,itisessentialthattheseparasitesavoidthehost’Searlyreactionstoinjurythatisoftenmediatedbycirculatingleukocytesandchemoattractantsderivedfromactivatedendotheliale
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