日本七鰓鰻I(yíng)RF基因克隆、表達(dá)抗體制備及相關(guān)免疫學(xué)研究.pdf

1、IRF因在病毒感染時(shí)能夠結(jié)合到干擾素基因的啟動(dòng)子上，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)干擾素的表達(dá)而得名。作為多功能轉(zhuǎn)錄因子，IRF在干擾素基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、造血干細(xì)胞發(fā)育、腫瘤的抑制以及病毒感染后的免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用，這使得IRF成為重要的免疫調(diào)節(jié)因子以及腫瘤治療的潛在藥物靶點(diǎn)。
　　七鰓鰻在進(jìn)化地位上處于無脊椎動(dòng)物與脊椎動(dòng)物之間。作為最古老的無頜類脊椎動(dòng)物的代表，七鰓鰻擁有著獨(dú)特的進(jìn)化地位和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。鑒于IRF在脊柱動(dòng)物

2、的免疫系統(tǒng)中所特有的防御機(jī)制，七鰓鰻的IRF具備怎樣的免疫應(yīng)答體系以及是否具有腫瘤抑制功能呢？目前有關(guān)七鰓鰻I(yíng)RF的研究尚不清楚。而我們首次對(duì)于日本七鰓鰻I(yíng)RF的初步探究，無論是在起源與進(jìn)化上還是在IRF的新功能的研究上將具有非常重要的意義。
　　本研究通過PCR的方法擴(kuò)增得到長(zhǎng)550bp的日本七鰓鰻I(yíng)RF核苷酸序列。選取長(zhǎng)372bp的IRF開放閱讀框，重新克隆和構(gòu)建IRF原核表達(dá)載體。用原核表達(dá)及親和純化得到的較純的IRF重組蛋

3、白作為抗原免疫新西蘭兔，制備兔抗日本七鰓鰻I(yíng)RF多克隆抗體。用ELISA和Western blot方法檢測(cè)純化后的多克隆抗體的效價(jià)和特異性，得到效價(jià)為1∶51萬且具有良好特異性識(shí)別能力的兔抗日本七鰓鰻I(yíng)RF多克隆抗體。進(jìn)一步對(duì)IRF進(jìn)行相關(guān)的免疫學(xué)研究。Western blot結(jié)果顯示，IRF分子主要表達(dá)于日本七鰓鰻的心、鰓、腎和髓樣組織中。同時(shí)，免疫組化結(jié)果也顯示IRF主要表達(dá)于上述四個(gè)組織中。受到HMGB1刺激后的免疫組化結(jié)果顯示，