B群鏈球菌多糖-蛋白質(zhì)結(jié)合疫苗的研究和制備.pdf

1、B群鏈球菌(Group B streptococcus,GBS)是新生兒細(xì)菌性肺炎、腦膜炎和敗血癥的主要致病菌,也是圍產(chǎn)期婦女細(xì)菌性感染的主要病原體,近年來(lái),在免疫力低下的成人中也呈上升趨勢(shì).莢膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)抗原與蛋白質(zhì)載體共價(jià)結(jié)合形成的結(jié)合疫苗是預(yù)防GBS感染性疾病的經(jīng)濟(jì)有效措施.這種疫苗的研制需要大量純化的莢膜多糖抗原,該試驗(yàn)選用分布廣、毒力強(qiáng)的血清ⅢGBS32325作為疫苗制備用的

2、生產(chǎn)菌株.通過(guò)搖瓶試驗(yàn)比較不同液體培養(yǎng)基、生長(zhǎng)因子和培養(yǎng)方法對(duì)GBS生長(zhǎng)的影響,優(yōu)化了培養(yǎng)條件,并逐級(jí)放大到10L和100L的發(fā)酵罐中進(jìn)行深層液體培養(yǎng),經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn),確立了GBS生長(zhǎng)和莢膜多糖合成的規(guī)律以及莢膜多糖抗原的收獲時(shí)間.GBS培養(yǎng)5-6小時(shí),發(fā)酵液中的菌濃度達(dá)到24億/mL,莢膜多糖含量達(dá)到562ug/mL,為菌體抗原收獲的最佳時(shí)間.建立起莢膜多糖抗原分離純化的工藝條件,用55％、75%乙醇從GBSⅢ發(fā)酵液中的分級(jí)沉淀莢膜多糖

3、,并經(jīng)過(guò)25%的乙醇沉淀去除核酸,冷的苯酚抽提去除雜蛋白,獲得純化莢膜多糖抗原.其得率為0.021g/L,0.042g/L;分配系數(shù)為0.52,0.68;殘留的蛋白質(zhì)含量和核酸含量均低于1%.以溴化氰(CNBr)作氧化劑,己二酰肼(ADH)為間橋,碳二亞胺(EDAC)為偶聯(lián)試劑,將2種純化的莢膜多糖抗原分別與蛋白質(zhì)載體(精制破傷風(fēng)類(lèi)毒素)共價(jià)偶聯(lián)制備成結(jié)合疫苗,2種結(jié)合物中分配系數(shù)≤0.08的結(jié)合物收率為20%和70%.用獲得的結(jié)合物及